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原文传递一种黑茶抗氧化活性的荧光分析方法

专利名称：	一种黑茶抗氧化活性的荧光分析方法
摘要：	本发明公开了一种黑茶抗氧化活性的荧光分析方法，包括喹啉基花菁类衍生物(CyQ)的制备、荧光探针(CyQ‑Cys)溶液的制备、金属选择性实验、Fe³⁺的检测测试、黑茶备用液的制取、黑茶备用液测试等步骤。本发明以4‑甲基喹啉与二醛缩合剂反应得到喹啉基花菁类衍生物(CyQ)，随后，喹啉基花菁类衍生物(CyQ)与半胱氨酸(Cys)通过卤素‑巯基亲核取代和重排反应得到荧光探针(CyQ‑Cys)，而铁离子(Fe³⁺)可诱导荧光探针(CyQ‑Cys)荧光信号明显增强，其荧光信号的变化与Fe³⁺浓度呈良好的线性关系，且荧光探针(CyQ‑Cys)可快速(＜30s)、高特异性识别Fe³⁺而不受常见离子的干扰。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	湖南;43
申请人：	湖南城市学院
发明人：	刘长辉;王贞睿;齐风佩;曹一鸣;罗苗;肖刘平
专利状态：	有效
发布日期：	2019-01-01T00:00:00+0800
申请号：	CN201810692139.5
公开号：	CN108896521A
分类号：	G01N21/64(2006.01)I;G;G01;G01N;G01N21;G01N21/64
申请人地址：	413000 湖南省益阳市迎宾东路518号
主权项：	1.一种黑茶抗氧化活性的荧光分析方法，其特征在于：具体包括以下步骤：S1、喹啉基花菁类衍生物(CyQ)的制备：将4‑甲基‑N‑乙基喹啉、N‑[(3‑(苯胺基亚甲基)‑2‑氯‑1‑环己烯‑1‑基)亚甲基]苯胺盐酸盐及无水醋酸钠溶于乙醇中，在氮气保护下于80℃反应1h，冷却后，旋蒸除溶剂，然后在氯仿和醋酸钠溶液中搅拌1h，过滤，真空干燥，柱层析分离，得到喹啉基花菁类衍生物(CyQ)，以4‑甲基喹啉与二醛缩合剂反应得到喹啉基花菁类衍生物(CyQ)，便于后续的使用；S2、荧光探针(CyQ‑Cys)溶液的制备：喹啉基花菁类衍生物(CyQ)用N，N‑二甲基甲酰胺配成10mol/L溶液，半胱氨酸(Cys)用去离子水配成200mmol/L溶液，在离心管中依次加入10mol/L的喹啉基花菁类衍生物(CyQ)溶液，逐滴加入200mmol/L的半胱氨酸(Cys)溶液，10mmol/L、pH值为7的磷酸缓冲盐溶液，混合均匀后用N，N‑二甲基甲酰胺稀释，反应3min，随后，用荧光分光光度计记录荧光信号的变化，通过卤素‑巯基亲核取代和重排反应得到荧光探针(CyQ‑Cys)母液；S3、金属选择性实验：金属盐用去离子水配成1.0mmol/L溶液备用。在荧光池中加入S2步骤中制备的荧光探针(CyQ‑Cys)溶液，测其荧光发射光谱，然后加入不同量的不同金属离子溶液，反应3min后，检测其荧光发射光谱，用荧光分光光度计记录荧光信号变化，检测荧光探针(CyQ‑Cys)用于Fe3+的特异性响应，尤其是，Fe3+与其它金属离子共存时，荧光探针(CyQ‑Cys)的抗干扰能力；S4、Fe3+的检测测试：在荧光池中加入S2步骤中制备的荧光探针(CyQ‑Cys)溶液，测其荧光发射光谱，然后加入不同浓度的Fe3+溶液，检测其荧光发射光谱，用荧光分光光度计记录荧光信号的变化，检测不同浓度的Fe3+溶液荧光强度相应的变化情况；S5、黑茶备用液的制取：称取未处理的安化黑茶和发酵后的安化黑茶于沸水中浸泡10min，残渣在加沸水浸泡2次，滤液合并后浓缩，然后加入容量瓶中，用蒸馏水定容，获得黑茶备用液；S6、黑茶备用液测试：在荧光池中加入S2步骤中制备的荧光探针(CyQ‑Cys)溶液和S5步骤中制取的黑茶备用液，检测其荧光发射光谱，用荧光分光光度计记录荧光信号的变化。
所属类别：	发明专利