详情

原文传递红参质谱数据的挖掘与特异性标志物的筛选方法

专利名称：	红参质谱数据的挖掘与特异性标志物的筛选方法
摘要：	本发明公开了一种红参质谱数据的挖掘与特异性标志物的发现方法，包括下述步骤：红参与白参提取物经液相色谱分离后通过质谱分析；采集质谱并通过数据处理软件对齐每个特征的m/z，Retention time，峰强度等；用代谢组学相关软件对标准化后的数据进行主成分分析，得到表达样本相似性和差异性的得分图；使用单变量统计分析方法确定红参的生物标志物；通过人参属其它物种的药材，进一步确定红参生物标志物的独特性；使用红参的强大的生物标志物作为人工神经网络的输入层，从多种人参属药材中鉴别红参；利用本发明的方法可以快速地、准确地将红参的生物标志物寻找出来，同时也为其他中药材寻找生物标记物提供新的思路和方法。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	辽宁;21
申请人：	中国科学院大连化学物理研究所
发明人：	张晓哲;赵强;赵楠;程孟春;刘欣欣
专利状态：	有效
发布日期：	2019-01-01T00:00:00+0800
申请号：	CN201810068370.7
公开号：	CN108593825A
代理机构：	沈阳科苑专利商标代理有限公司 21002
代理人：	马驰
分类号：	G01N30/86(2006.01)I;G06N3/02(2006.01)I;G06K9/62(2006.01)I;G;G01;G06;G01N;G06N;G06K;G01N30;G06N3;G06K9;G01N30/86;G06N3/02;G06K9/62
申请人地址：	116023 辽宁省大连市沙河口区中山路457-41号
主权项：	1.红参质谱数据的挖掘与特异性标志物的筛选方法，其特征是，包括下述步骤：(1)红参和白参中化合物的提取：分别取30个以上的不同来源的红参与白参药材进行粉碎得药材粉末，分别各取相同质量于离心管中，分别加入体积浓度10％‑50％乙腈水溶液为提取溶剂，药材粉末与溶剂的质量体积比为0.1g/ml‑0.3g/ml,混合均匀；超声10‑30分钟，分离，收集提取液，作为提取液1，或重复上述提取过程n次,n为大于等于1的整数，合并提取液，得到提取液1；将上述收集提取液1后剩余的药渣加入同上述相同体积但是体积浓度60％‑90％乙腈水为提取溶剂，混合均匀，再次提取；超声10‑30分钟，分离，收集提取液，作为提取液1，或重复上述提取过程n次,n为大于等于1的整数，合并提取液，得到提取液2；将上述提取液1和2分别加入二甲基亚砜(DMSO)，真空浓缩(除去乙腈和水)，分别得到浓缩物1和2；浓缩物1溶解于上述提取液1体积的1/5‑1/3，体积浓度为10％‑20％乙腈水溶液中，浓缩物2溶解于上述提取液2体积的1/5‑1/3，体积浓度为50％‑80％乙腈水溶液中；分别4‑10℃下超速离心10‑20分钟，分别收集上清1和2；(2)通过液质联用分别对红参和白参进行非靶向分析，对其组分进行测定：对(1)得到的上清液1和2，分别吸取并加入内标物(5‑氟尿嘧啶，没食子酸，原儿茶酸，3‑硝基苯酚，对叔丁基苯酚，和2,4‑二叔丁基苯酚的混合物，用于校准实验数据)，作为分析样品，通过液质联用进行非靶向分析，二元洗脱系统，流动相A为体积浓度为0.5％的醋酸水，B为乙腈；梯度如下：0min:2％B,流速0.1mL/min；1min:2％B,流速0.3mL/min；15min:100％B,流速0.3mL/min；20min:100％B,流速0.3mL/min；20.1min:100％B,流速0.1mL/min；在色谱柱温为50℃‑60℃下进行色谱分离；进样体积为1‑5μl；质谱仪采用电喷雾离子源负离子模式进行检测；质谱参数如下：毛细管电压为2800V‑3000V，锥孔电压为80‑150V，电喷雾气温度为340‑360℃，数据采集范围在100‑3000m/z；电喷雾气流量流量＝6.0‑10L/min；离子源电压＝80V；二级质谱采取10‑60eV的碰撞能量；每次扫描的采集时间为20‑40秒；(3)数据处理软件提取分析数据并导入到代谢组学相关软件进行主成分分析：通过数据处理软件软件提取步骤(2)由质谱仪所采集到的数据，对数据进行预处理(包括对特征的m/z和Retention time进行对齐和相同的特征进行合并等)，排除同位素分布为100的特征(可能是噪音离子)，生成峰强度列表；(4)数据挖掘来发现生物标志物：通过步骤(3)生成的红参和白参的峰强度列表，使用单变量分析方法的倍数变化和方差分析方法来发现相对于白参的红参的潜在标志物。
所属类别：	发明专利