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原文传递一种生物分子的电化学检测方法

专利名称：	一种生物分子的电化学检测方法
摘要：	本发明公开一种生物分子的电化学检测方法，属于生物分子检测技术领域。所述方法首先合成出具有电活性的二茂铁酪胺分子，然后通过还原法制备出石墨烯/血红素复合纳米材料，所述材料在H2O2的存在下能触发二茂铁修饰酪氨在电极表面的催化沉积反应，导致具有电活性的二茂铁分子在电极表面大量聚集，而产生增强的氧化还原电流。在生物分子检测过程中，检测到的氧化还原电流与生物分子的量在一定范围内成线性关系。通过电化学工作站检测所产生的氧化还原电流的大小，即可实现对生物分子的电化学检测。本发明建立的生物分子的电化学检测方法具有灵敏、操作简单、检测时间短等优点。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	广西;45
申请人：	广西医科大学
发明人：	赵永祥;黄勇;钟莉娉
专利状态：	有效
发布日期：	2019-01-01T00:00:00+0800
申请号：	CN201810243420.0
公开号：	CN108445063A
代理机构：	北京科亿知识产权代理事务所(普通合伙) 11350
代理人：	韦肖燕
分类号：	G01N27/30(2006.01)I;G01N27/327(2006.01)I;G;G01;G01N;G01N27;G01N27/30;G01N27/327
申请人地址：	530021 广西壮族自治区南宁市青秀区双拥路22号
主权项：	1.一种生物分子的电化学检测方法，其特征在于，包括制备石墨烯/血红素类过氧化酶复合纳米材料、制备二茂铁酪胺、制备适配体功能化复合材料、电极修饰和生物分子检测；所述制备石墨烯/血红素类过氧化酶复合纳米材料的步骤为：按质量比为1:15的比例分别称取石墨烯和血红素后，将石墨烯配置成石墨烯溶液，将血红素配置成血红素溶液，将两份溶液混合后，加入NH2‑NH2，涡旋10‑15 min后，60‑65℃水浴3‑5 h，15000‑20000 r/min离心25‑35 min，所得沉淀用超纯水洗涤，冻干，即得到石墨烯/血红素类过氧化酶复合纳米材料；所述制备二茂铁酪胺的步骤为：取二茂铁甲酸于无水CH2Cl2溶解，0ºC下缓缓滴加Et3N，再依次加入HBTU和HOBt，0ºC反应10‑15 h，溶液由黄色变为红色，旋转蒸干，层析纯化，得到红褐色活化物，将其溶于THF后，取酪胺溶于硼酸缓冲溶液，0ºC混合上述两种溶液并调pH至9‑10，反应8‑10 h后，室温反应20‑24 h，旋转蒸发除去THF，余下水相用EtOAc萃取一次后，将水相调pH至1‑2，EtOAc再次萃取；将所得两次萃取液合并，过滤、无水Na2SO4除水、再次过滤后旋转蒸发，所得产物用展开剂溶解，柱层析进行纯化，最后于35‑40ºC水浴锅中干燥即可得到二茂铁酪胺；所述制备适配体功能化复合材料的步骤为：将石墨烯/血红素类过氧化酶复合纳米材料与核酸链混合均匀，超声10‑15min后室温孵育24h，缓慢加入NaCl溶液；13000‑15000 r/min离心30‑40min取上清，洗涤3次后，重新分散在Tris‑EDTA缓冲液中，去除游离的适配体，即得适配体功能化复合材料；所述电极修饰的步骤为：将巯基丙酸与DNA1链合滴到处理好的金电极表面，0‑4ºC自组装10‑12h，PBS洗涤3次，用EDC/NHS室温活化30 min，PBS洗涤3次后，将电极浸泡在10 mM酪胺溶液30 min，用PBS洗涤3次，用1% BSA封闭非特异性位点，PBS洗涤3次，得修饰电极；所述生物分子检测的步骤为：将修饰电极表面滴加生物分子、生物识别分子及石墨烯/血红素类过氧化酶复合纳米材料，35‑37ºC孵育1 ‑2h后，PBS洗涤3次，最后在电极表面滴加酪胺、二茂铁酪胺、H2O2，50‑55ºC水浴30 min ，用PBS洗3次；以金电极为工作电极，铂电极为对电极，饱和甘汞电极为参比电极，在NaClO4电解液中利用电化学工作站进行DPV扫描，扫描范围‑0.2~0.6V，扫描速率100‑150 mV/s，通过电化学工作站检测到的氧化还原电流的大小，即可实现对电化学检测。
所属类别：	发明专利