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原文传递一种碱老化桑蚕丝模拟丝绸文物样的方法

专利名称：	一种碱老化桑蚕丝模拟丝绸文物样的方法
摘要：	本发明公开的是一种碱老化桑蚕丝模拟丝绸文物样的方法，属于文物模拟领域，采用氢氧化钠对桑蚕丝进行老化，碱老化结束以后将PH调节为中性，对溶液进行过滤，透析，冷冻干燥，研磨等操作后，利用研磨所得的粉末进行间接ELISA实验，根据实验结果筛选出了最接近文物样的碱老化样，该样品在今后利用不同抗体对未知丝绸文物样进行检测时，可以作为文物样的替代样，用于抗体最佳稀释倍数的筛选和抗体特异性、灵敏度测试等实验，一定程度上解决了文物样在大量不同、重复实验中样品不足的问题。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	浙江;33
申请人：	浙江理工大学
发明人：	王秉;李津;梁军龙;陈茹茹;李昊晖
专利状态：	有效
发布日期：	2019-01-01T00:00:00+0800
申请号：	CN201810235676.7
公开号：	CN108680405A
代理机构：	浙江纳祺律师事务所 33257
代理人：	郑满玉
分类号：	G01N1/28(2006.01)I;G01N1/38(2006.01)I;G01N1/44(2006.01)I;G01N33/531(2006.01)I;G01N33/543(2006.01)I;G01N33/68(2006.01)I;G;G01;G01N;G01N1;G01N33;G01N1/28;G01N1/38;G01N1/44;G01N33/531;G01N33/543;G01N33/68
申请人地址：	310018 浙江省杭州市下沙高教园区2号大街928号
主权项：	1.一种碱老化桑蚕丝模拟丝绸文物样的方法，其特征在于包括如下制备步骤：A)取10‑15g桑蚕丝生丝置于烧杯中，加入1000‑1500ml浓度为0.5％的Na2CO3溶液，在94‑98℃水浴中加热30min，倒掉烧杯中的溶液，并重复进行一次上述操作，然后将烧杯中剩余的桑蚕丝用去离子水冲洗3遍，置于60℃的烘箱中烘干备用；B)取1‑1.5g步骤A)所得的桑蚕丝置于烧杯中，剪碎后加入100‑150ml浓度为2.5mol/L的NaOH溶液，在25℃下置于10转/秒的磁力搅拌器上，匀速搅拌1小时后，加入冰醋酸调节PH至7；C)将步骤B)所得的溶液过滤，用分子截留量为8000的透析袋进行透析，每隔4‑6小时换一次水，透析3天后，将透析袋内剩余溶液冷冻干燥并研磨，得到碱老化1小时的桑蚕丝素蛋白粉末；D)重复步骤B)、步骤C)，分别制备获得碱老化3小时、6小时、9小时、12小时以及24小时的桑蚕丝素蛋白粉末；E)分别取1‑2mg步骤C)、步骤D)所制得的桑蚕丝素蛋白粉末以及研磨好的丝绸文物样，将其分别放入15ml的离心管中,每支离心管中加入10mlPH为9.6的碳酸盐缓冲溶液，震荡均匀后得到澄清的包被液；F)取一块96孔酶标板，每孔加入100μl步骤E)中所得包被液，所述酶标板中的每列加五个孔，该五个孔中均加入同一种包被液，列与列之间使用不同的包被液，其分别按照空白对照，阴性对照，阳性对照，碱老化1小时，碱老化3小时，碱老化6小时，碱老化9小时，碱老化12小时，碱老化24小时，丝绸文物样的顺序完成布板；G)对步骤F)中布置好的96孔板进行间接酶联免疫测试，其具体步骤为：每孔加入200μl的pH7.4的磷酸盐缓冲溶液进行洗涤，每次2分钟，共洗涤3次，然后每孔加入200μl的1wt％的牛血清蛋白溶液，37℃下孵育2h，进行封闭处理；每孔加入200μl的pH7.4的磷酸盐缓冲溶液进行洗涤，每次2分钟，共洗涤3次，然后每孔加入100μl的兔抗丝素蛋白一抗，37℃下孵育1h；每孔加入200μl的pH7.4的磷酸盐缓冲溶液进行洗涤，每次2分钟，共洗涤3次，然后每孔加入100μl的HRP标记的山羊抗兔抗体，37℃下孵育1h；每孔加入200μl的pH7.4缓冲溶液进行洗涤，每次2分钟，共洗涤5次，然后每孔加入50μl的TMB显色的剂A液，再加入50μl的TMB显色剂的B液，摇晃均匀，避光反应10min，然后每孔加入100μl的H2SO4终止反应，测试其在450nm处的吸光度，记为OD450nm。
所属类别：	发明专利