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原文传递一种检测血液中地西泮含量的液相色谱分析方法

专利名称：	一种检测血液中地西泮含量的液相色谱分析方法
摘要：	本发明检测血液中地西泮药物浓度的方法是使用液相色谱分析仪器和紫外检测器对标准溶液进行标定，拟合得到标准曲线方程为y＝a*x+b，取待测血液样品，在该待检测血液经过处理后，同样使用液相色谱分析仪器和紫外检测器对待测的样品进行检测，得到待测血液y值，将待测血液y代入标准曲线方程中，通过计算得到待测血液样品中目标物相对浓度x，内标物工作液浓度是已知的，由此计算得到该样本中待检测血液中的地西泮药物浓度，本发明将内标法与高效液相色谱法相结合，提高了定量结果的准确性，消除系统误差；并有效缩短了分析时间，使检测过程简便快速，更利于在临床治疗中对患者体内的地西泮血药浓度进行监测。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	北京;11
申请人：	北京和合医学诊断技术股份有限公司
发明人：	钱胡月;贾永娟;倪君君
专利状态：	有效
发布日期：	2019-01-01T00:00:00+0800
申请号：	CN201810075226.6
公开号：	CN107991421A
代理机构：	北京双收知识产权代理有限公司 11241
代理人：	李云鹏
分类号：	G01N30/06(2006.01)I;G01N30/88(2006.01)I;G;G01;G01N;G01N30;G01N30/06;G01N30/88
申请人地址：	101111 北京市大兴区北京经济技术开发区经海六路5号东尚E园14号楼
主权项：	一种检测血液中地西泮药物浓度的方法，其特征在于：它包括以下步骤：(一)标准溶液的标定首先将至少三种不同浓度的标准工作液10μL分别和10μL内标工作液及80μL的甲醇混合制成至少三种标准溶液，上述标准溶液分别在转速为1200‑2000rpm下涡旋混匀30s‑1min后，使用液相色谱分析仪器和紫外检测器对上述标准溶液进行检测，得出上述至少三种标准溶液的地西泮和内标色谱图，在上述地西泮和内标色谱图中分别得到标准目标物峰面积与内标物峰面积，以上述至少三个标准目标物峰面积与内标物峰面积的比值作为标准曲线图的纵坐标y，以上述标准工作液浓度与内标工作液浓度的比值即相对浓度为作为标准曲线图的横坐标x，将以上检测所得至少三组数据进行线性回归，拟合得到标准曲线方程为y＝a*x+b，并且得出权重系数a和b；所述标准工作液为地西泮溶液，所述内标工作液为氯硝西泮溶液；(a)标准工作液的配制：精确称取地西泮标准品5mg置于5ml容量瓶，用含水量为0％‑25％的甲醇溶液进行溶解，并定容于5ml，得到标准储备液A，将标准储备液A用含水量为0％‑25％的甲醇溶液的稀释液进行稀释，分别在含有0.5ug/mL‑50ug/mL地西泮的范围内配置出各标准工作液，并在‑20℃条件下保存；(b)内标工作液的配制：精确称取氯硝西泮标准品5mg置于5mL容量瓶，用含水量为0％‑25％甲醇溶解，并定容于5mL，得到标准储备液B，将标准储备液B用含水量为0％‑25％的甲醇溶液的稀释液进行稀释，得到浓度为10ug/mL的内标工作液，并在‑20℃条件下保存；(二)检测血液的离心取待检测血液至少5ml，在离心速度为3500rpm下离心10min，取上清液得血清或血浆，上述血清或血浆置于‑20℃冷冻下保存至分析前备用；(三)待测样品处理(c)用移液枪移取10μL步骤(b)中所述内标工作液于1.5ml离心管中，然后加入100μL步骤(二)中所述血清或血浆，在1200‑2000rpm的转速下涡旋震荡混合20s‑1min；(d)用移液枪移取800uL的乙酸乙酯加入步骤(c)的离心管中，在1200‑2000rpm的转速下涡旋震荡混合4‑6min，再在10000‑15000rpm的转速下高速离心4‑6min，得到上清液；(e)取步骤(d)上清液750uL放入另一支1.5ml离心管中，在常温下用N₂缓慢吹干；(f)向步骤(e)的上述吹干的离心管中加入100μL的甲醇，然后在1200‑2000rpm转速下涡旋混匀30s‑1min后，再在10000‑15000rpm的转速下高速离心4‑6min，得到上清液即为待测样品；(四)待测样品的检测使用液相色谱分析仪器和紫外检测器对上述步骤(f)待测的样品进行检测，得出上述待测的样品的地西泮和内标色谱图，在上述地西泮和内标色谱图中得到待测目标物峰面积与内标物峰面积，将待测目标物峰面积与内标物峰面积的比值y代入上述步骤(一)的标准曲线方程中，通过计算得到待检测样品中目标物相对浓度x，内标物工作液浓度是已知的，由此计算得到该样本中待检测血液中的地西泮药物浓度。
所属类别：	发明专利