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原文传递一种检测胃癌肿瘤标志物夹心型免疫传感器的制备方法及应用

专利名称：	一种检测胃癌肿瘤标志物夹心型免疫传感器的制备方法及应用
摘要：	本发明涉及一种检测胃癌肿瘤标志物夹心型免疫传感器的制备方法及应用，属于新型纳米功能材料、免疫分析和生物传感器领域。其制备三维多孔二硫化钼负载金纳米粒子h‑MoS₂/Au NPs作为基底材料修饰裸玻碳电极，提高肿瘤标志物捕获抗体的固载量，并有效加速电极表面的电子传递速率；制备正八面体氧化亚铜/二氧化钛核壳结构负载介孔铂铜纳米粒子Cu₂O@TiO₂/PtCu复合纳米材料固载检测抗体，并利用其对双氧水H₂O₂的优异电化学催化性能制得了简单、快速、灵敏的夹心型电化学免疫传感器，用于胃癌相关肿瘤标志物的检测。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	山东;37
申请人：	济南大学
发明人：	李法瀛;魏琴;冯金慧;曹伟;范大伟;吴丹;庞雪辉;马洪敏
专利状态：	有效
发布日期：	2019-01-01T00:00:00+0800
申请号：	CN201810616971.7
公开号：	CN108802133A
代理机构：	济南誉丰专利代理事务所(普通合伙企业) 37240
代理人：	高强
分类号：	G01N27/30(2006.01)I;G01N27/327(2006.01)I;G;G01;G01N;G01N27;G01N27/30;G01N27/327
申请人地址：	250022 山东省济南市市中区南辛庄西路336号
主权项：	1.一种检测胃癌肿瘤标志物夹心型免疫传感器的制备方法，其特征在于，制备步骤如下：(1) 制备h‑MoS2/Au NPs取20～24mg的(NH4)2MoS4和2mL、质量分数为1% 的HAuCl4·4H2O混合溶解在20mL的超纯水中，超声10min；随后，加入100 µL的水合肼溶液，超声30min，使混合液均匀分散；将混合液转移到50mL的聚四氟乙烯反应釜中，加热至180～220℃，反应8～12h；冷却至室温，超纯水和乙醇依次离心洗涤2～4次；产物再次溶解在3mL超纯水中，冻干机干燥，制得h‑MoS2/Au NPs；(2) 制备Cu2O@TiO2/PtCu‑Ab2检测抗体孵化物溶液将8 ~ 12 mL、2.0 mol/L的NaOH溶液逐滴加入到含3.33g聚乙烯吡咯烷酮的100mL、0.01 mol/L的CuCl2溶液中，充分搅拌0.5h；继续将8 ~ 12 mL、0.6 mol/L的抗坏血酸溶液逐滴加入到上述混合液中，55℃下充分搅拌2 ~ 4 h；离心分离，所得沉淀用超纯水和无水乙醇依次洗涤三次；室温下真空干燥12 h，制得Cu2O正八面体；取23~27 mg的Cu2O正八面体溶解于65mL的超纯水中，超声10min，分散均匀；将0.9~1.1 mL、0.02 mol/L的TiF4水溶液缓慢逐滴加入到Cu2O悬浮液中，充分搅拌1h，使混合液均匀分散；将混合液转移到100mL的聚四氟乙烯反应釜中，加热至160～200℃，反应0.5h；冷却至室温，超纯水和乙醇依次离心洗涤2～4次；60 ℃真空干燥，制得Cu2O@TiO2正八面体纳米晶体；将80 ~120 mg的Cu2O@TiO2加入到8 ~ 12 mL的无水乙醇中，加入0.1~ 0.2 mL的3‑氨丙基三乙氧基硅烷，70℃回流1.5 ~ 2.5 h，离心分离，超纯水洗涤，80℃干燥12h，得到Cu2O@TiO2‑NH2；取0.3~0.5g精氨酸和1.0~1.2g聚乙烯吡咯烷酮溶解在45 mL的超纯水中，超声10min，分散均匀；磁力搅拌下，将3.5 ~ 4.0mL、0.05 mol/L的H2PtCl6 4H2O和1.0~1.5mL、0.05 mol/L的CuCl2溶液混合加入到上述混合溶液中，超声20分钟，使混合液均匀分散；将混合液转移到聚四氟乙烯反应釜中，加热至180～220℃，反应1.5～2.5 h；冷却至室温，得到介孔PtCu合金纳米粒子溶液；将8 ~ 12 mg 的Cu2O@TiO2‑NH2加入到30mL的介孔PtCu合金纳米粒子溶液中，振荡12 h，离心洗涤，制得Cu2O@TiO2/PtCu；配置3 mL、2.5 ~ 3.5 mg/mL的Cu2O@TiO2/PtCu检测抗体标记物溶液，加入3 mL、100 µg/mL的肿瘤标志物检测抗体Ab2溶液，4℃恒温振荡培养箱中振荡孵化12 h；离心分离后，加入3 mL、pH=7.17磷酸盐缓冲溶液，得到Cu2O@TiO2/PtCu‑Ab2检测抗体孵化物溶液，4℃下保存备用；(3) 制备夹心型电化学免疫传感器1) 将直径为4 mm的玻碳电极用Al2O3抛光粉打磨，超纯水清洗干净；2) 将6 µL、1.0~3.0 mg/mL的h‑MoS2/Au NPs溶液滴涂在电极表面，晾干，用超纯水冲洗，晾干；3) 继续将6 µL、8 ~ 12 µg/mL的肿瘤标志物捕获抗体Ab1溶液滴涂到电极表面，4℃晾干；4) 继续滴加3 µL、质量分数为0.1~1.0 %的牛血清白蛋白BSA溶液到修饰电极表面，以封闭电极表面上未结合Ab1的非特异性活性位点，用pH为7.17的磷酸盐缓冲溶液冲洗电极表面，4ºC晾干；5) 超纯水冲洗掉未结合的BSA后，继续滴加6 µL、10 fg/mL~200 ng/mL的一系列不同浓度的肿瘤标志物抗原标准溶液到电极表面，4 ℃晾干，超纯水冲洗；6) 将6 µL、2.0~4.0 mg/mL的肿瘤标志物检测抗体孵化物Cu2O@TiO2/PtCu‑Ab2溶液滴涂到电极表面，室温下孵化30~60 min，用pH为7.17的磷酸盐缓冲溶液冲洗电极表面，4℃晾干，制得一种检测胃癌肿瘤标志物的夹心型免疫传感器。
所属类别：	发明专利