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原文传递一种生物膜生物量的检测方法

专利名称：	一种生物膜生物量的检测方法
摘要：	本发明公开了一种生物膜生物量的检测方法，包括实验材料与方法：载片插入杯壁楔形槽内，通过中轴转子的转动带动水体流动，从而在载片表面形成剪切力，模拟；生物量分析方法：VIS‑7220可见光分光光度计，DTL‑300型超声波清洗机试验药剂均为分析纯；HPC法和脂磷法：生物量的分析方法分别采用异样菌平板计数法（HPC）和脂磷法，培养温度为22℃，培养时间为7天利于不同生长特性的细菌生长，通过生物培养法获取生物量；其优点：目的解决生物量对于数值范围为0.100‑0.001 g/g活性炭存在误差较大，有效性较差，平板菌落计数法中因为大部分的微生物不可培养，而造成检测出的生物量远小于实际的生物量，通过脂磷法检测生物量较为灵敏，适用范围宽，能准确有效评价微生物数量。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	上海;31
申请人：	上海华严检测技术有限公司
发明人：	任凌颖
专利状态：	有效
发布日期：	2019-01-01T00:00:00+0800
申请号：	CN201810017956.0
公开号：	CN108226068A
代理机构：	北京华仲龙腾专利代理事务所(普通合伙) 11548
代理人：	李静
分类号：	G01N21/31(2006.01)I;G;G01;G01N;G01N21;G01N21/31
申请人地址：	200090 上海市杨浦区隆昌路210号C401-403室
主权项：	1.一种生物膜生物量的检测方法，其特征在于，包括实验材料与方法、生物量分析方法、HPC法和脂磷法，实验材料与方法：所述载片插入杯壁楔形槽内，通过中轴转子的转动带动水体流动，从而在载片表面形成剪切力，模拟实际给水管道；生物量分析方法：所述VIS‑7220可见光分光光度计，DTL‑300型超声波清洗机试验药剂均为分析纯；HPC法和脂磷法：所述生物量的分析方法分别采用异样菌平板计数法（HPC）和脂磷法，培养基采用R2A培养基，R2A培养基属于低营养培养基，更能针对给水管网的贫营养环境，其培养温度为22℃，更接近实际管网温度，培养时间为7天，更有利于不同生长特性的细菌生长，其中将生物膜剥落于无菌水中形成悬浮菌液，通过生物培养法获取生物量；其方法如下：绘制标准曲线：分别取磷标准使用溶液0.0、0.5、1.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0 mL于25 mL具塞刻度管中，加水至25 mL，混匀；向上述比色管中分别加入4 mL过硫酸钾，将盖塞紧后，用纱布和橡皮筋将比色管的玻璃塞扎紧固定，放在500 mL烧杯中置于蒸汽压力灭菌锅中加热(121℃，30 min)，待压力降为零后，取出放冷，然后用蒸馏水稀释至标线；移液枪加入1 mL抗坏血酸溶液混匀，30s后加入2 mL钼酸盐溶液混合均匀；室温放置15 min后，使用光程为30mm石英比色皿，在700nm波长下，以水为参比，测定各溶液的吸光度，扣除空白试验的吸光度后，根据吸光度值及对应溶液浓度绘制磷标准曲线；制备空白试样：称量6 g试样，加入20 mL无菌水，放在振荡器上130 r/min 振荡40 min，再用超声清洗仪（100W）超声2 min，弃掉溶液，将样品置于恒温干燥箱中150℃烘干2 h，冷却后用无菌水冲洗烘干后的炭样，去掉生物膜，称取6 g试样（精确至0.01g），置于100 mL灭菌后的具塞锥形瓶中，上述样品和空白试样中，均用移液枪加入三氯甲烷 5 mL，无水甲醇10 mL，无菌水4 mL，然后盖紧瓶塞，放在振荡器上130 r/min 振荡40 min，最后，再用超声清洗仪（100W）超声2 min，静置12 h后，再向锥形瓶中加入三氯甲烷5 mL，无菌水5mL，静置12 h，用移液枪缓慢吸取锥形瓶中液体，转移至25 mL具塞比色管中，待溶液分层后，用移液枪将上层液体转移至另一25 mL具塞比色管中，分别水浴（100℃）蒸干40 min，冷却至室温后，将上述2个比色管中的剩余液体置于同一个具塞比色管中，并用少量蒸馏水润洗，分别向上述比色管中加入4 mL过硫酸钾溶液，并加蒸馏水稀释至25 mL标线，盖紧塞子后，用纱布扎紧置于500 mL烧杯中，蒸气压力灭菌锅内121℃消解30 min，待压力表读数降至零后，取出放冷，并用水稀释至标线，加入1.0 mL抗坏血酸溶液混合均匀，30s后加入2.0 mL钼酸盐溶液充分混匀，1.8 室温下放置15 min后，使用光程为30 mm比色皿，水为参比，在700 nm波长下测定吸光度，扣除空白试样的吸光度后，从标准曲线上查的磷的含量。
所属类别：	发明专利