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原文传递 一种基于生物膜干涉技术的沙门氏菌快速检测方法
专利名称: 一种基于生物膜干涉技术的沙门氏菌快速检测方法
摘要: 本发明公开了一种基于生物膜干涉技术的沙门氏菌快速检测方法,其方法为:步骤一、传感器活化;步骤二、抗体固定化;步骤三、封闭;步骤四、样品检测及结果判断;本发明的有益效果:本发明提供的基于生物膜干涉技术的沙门氏菌快速检测方法步骤少、操作简单易学、无需任何标记;该方法检测时间短,由于该方法的其他环节可以提前准备妥当,所以可以做到样品的随到随检。根据样品中所含目标菌浓度的不同,单纯的样品检测环节只需要数十秒到几分钟的时间。本发明所述方法可应用于粗样品的检测,检测前样品无需经过离心和脱气。本发明所述方法配合可商购的基于BLI技术的设备和系统,可实现多个样品(例如96个样品)的同时批量检测。
专利类型: 发明专利
国家地区组织代码: 吉林;22
申请人: 吉林大学
发明人: 张晓光;藏程琳;孙春燕;张鸣镝;刘佰潼;刘凯;刘泽同;刘志伟
专利状态: 有效
申请日期: 2019-09-25T00:00:00+0800
发布日期: 2019-12-31T00:00:00+0800
申请号: CN201910908072.9
公开号: CN110632301A
代理机构: 长春市恒誉专利代理事务所(普通合伙)
代理人: 鞠传龙
分类号: G01N33/569(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址: 130012 吉林省长春市前进大街2699号
主权项: 1.一种基于生物膜干涉技术的沙门氏菌快速检测方法,其特征在于:包括传感器活化、抗体固定化、封闭、样品检测及结果判断,其具体步骤如下: 步骤一、传感器活化:将第二代氨基偶联传感器末端浸入纯水中预湿至少10分钟后,浸入15-25mM 1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐和8-12mM N-羟基琥珀酰亚胺混合活化试剂中活化150-450秒; 步骤二、抗体固定化:将活化后的第二代氨基偶联传感器浸入用pH 4-6的醋酸-醋酸钠缓冲溶液稀释的浓度为12.5-100μg/mL的抗体溶液中固定化180-900秒; 步骤三、封闭:抗体固定化后,将第二代氨基偶联传感器依次浸入0.8-1.5M乙醇胺盐酸盐溶液和0.8-1.5%牛血清白蛋白溶液中封闭150-450秒; 步骤四、样品检测及结果判断:将已封闭的第二代氨基偶联传感器浸入含0.01-0.03%吐温-20的磷酸盐缓冲溶液中平衡60-180秒,而后浸入待测样品中进行沙门氏菌的检测,检测过程中实时读取结合信号,对于定性分析,当结合信号大于等于有效信号值0.0075nm时即可判定样品中含有沙门氏菌;对于定量分析,将结合时间为60秒、120秒、180秒、300秒时的结合信号y分别代入到下述菌浓度和结合信号间的数学公式(1)、(2)、(3)、(4): C60=10ln(41349.7y+277.0)^0.98499 (1) C120=10ln(11293.1y+160.5)^1.11054 (2) C180=10ln(16331.9y+179.7)^1.04064 (3) C300=10ln(13112.1y+146.1)^1.04585 (4) 求解所得C即为样品中沙门氏菌的具体浓度,其中C60、C120、C180和C300分别代表结合时间为60秒、120秒、180秒和300秒时求得的菌浓度,结合时间为60秒、120秒、180秒、300秒时所对应的沙门氏菌的最低检出限分别是1.9×106CFU/mL、1.3×106CFU/mL、8.8×105CFU/mL和5.6×105CFU/mL。
所属类别: 发明专利
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