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原文传递一种共用共反应试剂类型的呕吐毒素比率型电致化学发光免疫传感器及其检测方法

专利名称：	一种共用共反应试剂类型的呕吐毒素比率型电致化学发光免疫传感器及其检测方法
摘要：	本发明公开一种共用共反应试剂类型的呕吐毒素比率型电致化学发光免疫传感器的制备方法及应用，特点是基于较高孔隙率的表面活性剂辅助合成的TiO₂介晶（sas‑TiO₂MCs）及大比表面积的螺旋碳管(HCNTs)纳米材料作为生物传感器平台，分别引入钌联吡啶衍生物和鲁米诺两种信号探针。此外，由于二茂铁甲酸（FCA）具有猝灭钌联吡啶衍生物并同时增强鲁米诺的ECL信号特点，而被选作双功能共反应试剂用于构建一种共用共反应试剂类型的呕吐毒素比率型电致化学发光免疫传感器，该传感器具有灵敏度高、稳定性好、检测限低等优点，可用于呕吐毒素的检测，在临床应用及食品安全监控方面具有较重要的应用价值。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	福建;35
申请人：	福建师范大学
发明人：	林欢欢;戴宏;郑祥钦;衣欢;郑红利;颜建英;林丹玫;林燕语;房丹丹;王佳妮;陈妍洁;刘楠囡
专利状态：	有效
发布日期：	2019-01-01T00:00:00+0800
申请号：	CN201810406113.X
公开号：	CN108827946A
代理机构：	福州智理专利代理有限公司 35208
代理人：	王义星
分类号：	G01N21/76(2006.01)I;G01N33/536(2006.01)I;G;G01;G01N;G01N21;G01N33;G01N21/76;G01N33/536
申请人地址：	350108 福建省福州市闽侯县上街镇学园路福建师大旗山校区福建师大科技处
主权项：	1.一种共用共反应试剂类型的呕吐毒素比率型电致化学发光免疫传感器的制备方法，其特在于，包括以下步骤：（1）玻碳电极（GCE）首先在铺有氧化铝粉末的麂皮上机械打磨抛光，用二次水洗去表面残留粉末，再移入超声水浴中清洗，直至清洗干净，最后依序用乙醇，稀酸和水彻底洗涤；（2）取80 μL 0.5wt.%全氟磺酸‑聚四氟乙烯共聚物（Nafion）溶液与20 μL10 mg/mL离子液体（IL）混合，经几分钟震荡之后，将100 μL 2 mg/mL sas‑TiO2 MCs溶液加入到上述复合物溶液中，并在室温下震荡30 min以确保sas‑TiO2 MCs分散均匀，最终制得Nafion‑IL‑sas‑TiO2 MCs复合物；滴加5 μL上述所得Nafion‑IL‑sas‑TiO2 MCs复合物悬浮液于干净的玻碳电极表面，红外灯下烘干，冷却至室温，制得Nafion‑IL‑sas‑TiO2 MCs修饰玻碳电极；（3）将Nafion‑IL‑sas‑TiO2 MCs修饰电极浸入到浓度为1.0×10‑3 mol/L的 Ru(dcbpy)32+溶液中1 h，后用去离子水洗去物理吸附的Ru(dcbpy)32+，制得Nafion‑IL‑sas‑TiO2 MCs/Ru(dcbpy)32+修饰玻碳电极；（4）滴加5 μL呕吐毒素抗体（Ab1）于步骤（3）制备的修饰电极界面，并置于4°C冰箱中孵育40 min，用去离子水冲洗电极表面，制得Nafion‑IL‑sas‑TiO2 MCs/Ru(dcbpy)32+/Ab1修饰玻碳电极；将上述修饰电极浸入浓度为1.0 wt.%的BSA溶液中孵育30 min，以封闭电极表面上非特异性活性位点，用去离子水冲洗电极表面洗去物理吸附，并保存在4°C冰箱中备用；（5）将步骤（4）获得的修饰电极浸入不同浓度的呕吐毒素（DON）标准溶液中并在4°C冰箱中孵育40 min，用去离子水冲洗电极表面，制得Nafion‑IL‑sas‑TiO2 MCs/Ru(dcbpy)32+/Ab1/DON修饰玻碳电极, 并保存在4 °C冰箱中备用；（6）取20 μL浓度比为4:1的（1‑(3‑二甲氨基丙基)‑3‑乙基碳二亚胺盐酸盐）（EDC）及N‑羟基琥珀酰亚胺（NHS）混合液加入到100 μL 5 mg/mL 酸化的螺旋碳管（HCNTs）溶液中，室温震荡30 min，以达到活化羧基的目的；然后将100 μL 10 mmol/L鲁米诺（luminol）加入到上述混合溶液中，在室温下混合震荡4 h，后经洗涤、离心、再分散制得HCNTs‑luminol复合物溶液；同时，将100 μL10 mmol/L二茂铁甲酸（FCA）与20 μL浓度比为4:1的（1‑(3‑二甲氨基丙基)‑3‑乙基碳二亚胺盐酸盐）（EDC）及N‑羟基琥珀酰亚胺（NHS）溶液混合，在室温下震荡30 min，后加入100 μL 10 mg/mL Ab2溶液在4 ºC下震荡过夜，制得FCA‑Ab2复合物溶液；取体积比为1:1的上述复合物溶液HCNTs‑luminol和FCA‑Ab2在室温下混合震荡3 h，经离心、洗涤、再分散制得HCNTs‑luminol@FCA‑Ab2复合物溶液，然后在上述溶液中加入1 % BSA封闭非特异性吸附位点，储存在4 ºC冰箱中备用；（7）将步骤（5）获得的修饰电极浸入50 μL按步骤（6）制得的HCNTs‑luminol@FCA‑Ab2复合物溶液并在4°C冰箱中孵育40 min，用去离子水冲洗电极表面，制得Nafion‑IL‑sas‑TiO2 MCs/Ru(dcbpy)32+/Ab1/DON/Ab2‑FCA@luminol‑HCNTs修饰玻碳电极, 并保存在4 °C冰箱中备用。
所属类别：	发明专利