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原文传递一种基于液质联用代谢组学分析玛咖标志性代谢产物的方法

专利名称：	一种基于液质联用代谢组学分析玛咖标志性代谢产物的方法
摘要：	本发明涉及一种基于液质联用代谢组学分析玛咖标志性代谢产物的方法。本发明通过甲醇提取玛咖代谢物，前处理后进行UHPLC‑Q Exactive Orbitrap LC‑MS分析，使用Compound Discover处理数据，再将数据导入SIMCA14.0软件，使用主成分分析(PCA)、偏最小二乘判别分析(PLS‑DA)和正交‑偏最小二乘判别分析(OPLS‑DA)分析数据，寻找差异性代谢产物；使用置换排列检验方法检验PLS‑DA模型建立有效性，结果显示模型建立有效。本发明的分析方法操作简单，寻找不同表型玛咖代谢产物，从而用于不同表型玛咖的区分鉴别。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	山东;37
申请人：	烟台新时代健康产业有限公司
发明人：	杨长军;耿越;王桐;刘梅;徐宏楠;梁晓庆;仲米存
专利状态：	有效
发布日期：	2019-01-01T00:00:00+0800
申请号：	CN201810251416.9
公开号：	CN108535375A
代理机构：	烟台上禾知识产权代理事务所(普通合伙) 37234
代理人：	刘志毅
分类号：	G01N30/02(2006.01)I;G01N30/06(2006.01)I;G;G01;G01N;G01N30;G01N30/02;G01N30/06
申请人地址：	264000 山东省烟台市经济技术开发区淮河路6号
主权项：	1.一种基于液质联用代谢组学分析玛咖标志性代谢产物的方法，其特征在于，步骤如下：(1)玛咖提取液的制备将玛咖与甲醇混合，经超声提取后，离心，所得上清液过孔径0.22μm滤膜，即得玛咖提取液，置于‑80℃备用；(2)玛咖提取液预处理将步骤(1)的玛咖提取液用甲醇稀释15‑20倍，经过稀释后的玛咖提取液过孔径0.22μm滤膜，得滤液；(3)分析检测将步骤(2)的滤液采用UHPLC‑Q Exactive Orbitrap LC‑MS上样分析检测，检测参数为：色谱柱为ACQUITY UPLC BEH C18柱2.1×50mm，1.7μm；正谱条件：洗脱液A相为含0.1％(v:v)甲酸的乙腈溶液，B相为0.1％(v:v)甲酸水溶液；梯度洗脱流程为：0‑2min 1％A，2‑3.25min 1％‑5t％A，3.25‑4.25min 5％A，4.25‑7.75min 5％‑55％A，7.75‑9.75min 55％‑90％A，9.75‑14.75min 90％A，14.75‑15min 90％‑1％A，15‑18min 1％A；负谱条件：洗脱液A相为含0.1％(v:v)甲酸的乙腈溶液，B相为10mM醋酸铵；梯度洗脱流程为：0‑2min 1％A，2‑3.25min 1％‑5％A，3.25‑4.25min 5％A，4.25‑7.75min 5％‑55％A，7.75‑9.75min 55％‑90％A，9.75‑14.75min 90％A，14.75‑15min 90％‑1％A，15‑18min 1％A；流速：0.3mL/min；进样体积：2μL；1min之前和16min之后不进质谱；质谱条件：一级质谱分辨率70000(FWHM)，鞘气40Arb，辅助气10Arb，反吹气0Arb，正谱喷雾电压3.5KV,负谱喷雾电压3.1kV，毛细管温度320℃，辅助气温度350℃，扫描范围75‑1125，扫描模式Full MS；(4)Compound Discover数据处理使用Compound Discover软件对原始数据进行提取、分析、整理，通过峰对齐、去卷积、降噪、归一化处理，得到原始数据矩阵；在Compound Discover数据处理过程中设置参数保留时间偏差为0.2min，质量偏差为5ppm，信噪比最大窗口为3，信号强度最大偏差30％，基础离子[M+H]+1、[M‑H]‑1，未知元素组成设定C90、H190、K、N5、Na、O15、P3、S5；(5)SIMCA软件数据处理将步骤(4)的原始数据矩阵导入SIMCA14.0进行分析，使用主成分分析PCA、偏最小二乘判别PLS‑DA和正交‑偏最小二乘判别OPLS‑DA分析数据，运用置换排列实验检验；在正交‑偏最小二乘判别OPLS‑DA中导出的第一主成分的变量权重重要性排序值VIP，结合原始数据矩阵中的物质在两种玛咖中峰面积比值Ratio和P值，VIP值大于1、Ratio值大于2或小于0.5且P值小于0.01的代谢物即认定为玛咖标志性代谢产物；(6)玛咖标志性代谢产物的二级质谱信息将步骤(5)的玛咖标志性代谢产物进行二级质谱分析，得到二级质谱信息；质谱条件：二级质谱分辨率17500(FWHM)，扫描模式Ms/Ms，HCD高能碰撞池碰撞能量NCE：30、50、100、150；二级质谱保留时间与一级质谱保留时间的允许偏差为0.2min，保留时间对应的物质即为不同表型玛咖的标志性代谢产物。
所属类别：	发明专利