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基于电化学发光特性传感的转肽酶检测方法
| 专利名称： | 基于电化学发光特性传感的转肽酶检测方法 |
| 摘要： | 本发明公开了一种基于电化学发光特性传感的转肽酶检测方法，具体包括以下步骤：水合铱配合物的制备、连接反应、信号探针标记以及电化学发光检测，利用金属环化铱配合物的电化学发光特性进行传感，通过电化学发光强度的变化判断转肽酶的浓度、活性变化；本发明能快速对转肽酶的浓度和活性进行检测，检测过程简单、易操作，并且检测所用试剂及设备价格低廉，检测过程环保无污染。 |
| 专利类型： | 发明专利 |
| 国家地区组织代码： | 湖南;43 |
| 申请人： | 湖南人文科技学院 |
| 发明人： | 陈红军;刘秀 |
| 专利状态： | 有效 |
| 申请号： | CN201810845826.6 |
| 公开号： | CN109187508A |
| 代理机构： | 长沙新裕知识产权代理有限公司 43210 |
| 代理人： | 周跃仁 |
| 分类号： | G01N21/76(2006.01)I;G;G01;G01N;G01N21 |
| 申请人地址： | 417000 湖南省娄底市娄星区育才路628号 |
| 主权项： | 1.基于电化学发光特性传感的转肽酶检测方法，其特征在于，具体包括以下步骤：步骤1：水合铱配合物的制备a、取[Ir(bpy)2Cl]2溶于二氯甲烷中；b、取AgOTf溶于甲醇溶液中；c、将b制备的溶液缓慢滴加到搅拌中的a制备的溶液中；d、室温下反应1小时，减压过滤，用二氯甲烷洗涤；e、取滤液，减压蒸馏除去二氯甲烷和甲醇，得到黄色粉末即为反应产物Ir(OH2)2，步骤2：连接反应及信号探针标记a、多肽连接反应将反应底物P1、P2以及Sortase A加入到反应缓冲液中，混合均匀，多肽连接反应2h，生成P3；其中P1：Ac‑GALPHTGAT‑CH3，P2：GGGHGA‑CH3，P3：Ac‑GALPHTGGGHGA‑CH3；b、向a的反应体系中加入500μM步骤1制得的Ir(OH2)2混合均匀，生成金属环化铱配合物Ir‑P3，在37℃恒温培养箱中孵育30min，对金属环化铱配合物进行电化学探针标记；步骤3：电化学发光检测取5μL电化学探针标记后的金属环化铱配合物，注入到含有400μL发光检测液的ITO工作电极检测池中，以铂丝为对电极，Ag/AgCl电极为参比电极，在工作电极上施加0.2V～1.25V的电压，毛细管高压750V，放大级数3倍，检测工作电极上的电化学发光信号。 |
| 所属类别： | 发明专利 |
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