专利名称: |
一种用纤维素酶原位修饰金芯片的方法 |
摘要: |
本发明涉及纤维素酶原位修饰金芯片的方法。石英晶体微天平(QCM)和表面等离子体共振仪(SPR)技术是实时、原位研究生物大分子在固体界面的吸附是重要工具,前者同时检测石英晶体频率的变化(对应感应器上的重量)和吸附层的能量耗散值(对应感应器上薄膜的结构)的变化,后者只研究“干物质”的变化。传统的研究纤维素酶与底物的方法是把底物固定在QCM或SPR芯片上,然后把纤维素酶作为流动相通过,以研究二者的相互作用。本发明运用原位修饰的方法,把纤维素酶结合到金芯片上,构筑了表面均匀的纤维素酶薄膜,拓宽QCM或SPR的应用范围来研究纤维素酶与体系中其他高分子的相互作用。 |
专利类型: |
发明专利 |
国家地区组织代码: |
江苏;32 |
申请人: |
南京林业大学 |
发明人: |
宋君龙;王沛沛;杨益琴;吴淑芳;王志国;任浩;金永灿;戴红旗 |
专利状态: |
有效 |
申请号: |
CN201811053640.3 |
公开号: |
CN109239182A |
分类号: |
G01N29/02(2006.01)I;G;G01;G01N;G01N29 |
申请人地址: |
210037 江苏省南京市龙蟠路159号 |
主权项: |
1.一种纤维素酶原位修饰金芯片的方法,其特征在于包括如下步骤:步骤(1):所用芯片为金表面的QCM或SPR芯片,实验前将金芯片清洗后用氮气吹干,然后放入紫外‑臭氧清洗机照射10‑30min;步骤(2):用75%乙醇为溶剂配制40mM的11‑巯基十一烷酸(MUA)与3‑巯基丙酸(MPA);步骤(3):用pH为7.4的0.05mM的磷酸盐缓冲溶液配制2mM的1‑乙基‑(3‑二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(EDC)和5mM的N‑羟基硫代琥珀酰亚胺钠盐(NHSS)的溶液,和50μg/ml的纤维素酶液体;步骤(4):将步骤(1)清洗并照射后的芯片放置在QCM或SPR流动池内;步骤(5):首先以0.1ml/min的流速通入75%的乙醇溶液把基线走平;步骤(6):待平稳后,把步骤(2)中配制的MPA和MUA溶液按体积比10∶1的比例混合后,以0.1ml/min的流速通入QCM或SPR流动池,待检测信号平衡后通入75%乙醇冲洗;步骤(7):接下来把步骤(3)中配制的EDC和NHSS溶液以体积比1∶1混合,然后以0.1ml/min的流速通入系统,15min后停止通液体;步骤(8):一小时后重新启动泵,以0.1ml/min的流速通入pH为7.4的0.05mM的磷酸盐缓冲溶液;步骤(9):待信号平稳后以0.1ml/min的流速通入步骤(3)配制的纤维素酶液体,纤维素酶吸附到芯片上,待吸附平衡后通入磷酸盐缓冲溶液冲洗去未牢固结合的纤维素酶,最后得到原位纤维素酶修饰的金芯片。 |
所属类别: |
发明专利 |