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一种测定C反应蛋白的化学发光免疫方法
| 专利名称： | 一种测定C反应蛋白的化学发光免疫方法 |
| 摘要： | 本发明公开了一种测定C反应蛋白的化学发光免疫方法。本发明方法的流程示意图如摘要附图所示，该方法发光强度和发光效率高，对C反应蛋白的检测灵敏度高；通过将其他抗原、CRP以及CRP和其他抗原的混合物在CRP免疫传感阵列上进行温育，评价该免疫传感阵列和其他非特异性吸附分析物之间的交叉反应性，CRP免疫传感阵列只在目标CRP存在时才会产生强的信号响应，表明本法特异性良好，可忽略交叉反应的影响；将该法用于测定五组人血清样品中的CRP浓度，将测定结果与商业化的电致化学发光检测法进行比较，相对误差≤4.94％，表明本法结果准确可靠。 |
| 专利类型： | 发明专利 |
| 国家地区组织代码： | 江苏;32 |
| 申请人： | 中国药科大学 |
| 发明人： | 李萍;宗晨;张多多;杨华 |
| 专利状态： | 有效 |
| 申请号： | CN201811501173.6 |
| 公开号： | CN109298187A |
| 代理机构： | 长沙新裕知识产权代理有限公司 43210 |
| 代理人： | 赵超 |
| 分类号： | G01N33/68(2006.01)I;G;G01;G01N;G01N33 |
| 申请人地址： | 211198 江苏省南京市江宁区龙眠大道639号 |
| 主权项： | 1.一种测定C反应蛋白CRP的化学发光免疫方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤S1，CRP免疫传感器芯片的制备：在醛基片表面粘贴一层疏水、无光活性膜，构建出若干个传感池；取10μg/mL CRP的包被抗体Ab110μL滴加到传感池中，4℃下温育过夜，用冲洗缓冲液冲洗并干燥，实现将Ab1固定在醛基片表面，构建出具有若干个检测位点的CRP免疫传感器芯片；步骤S2，探针A、B的合成：探针A的合成：25μL 10μM DNA‑A、25μL 10μM DNA‑hemin、25μL 10μM biotin‑DNA缓慢加入1mL银纳米粒子溶液中，常温下缓慢搅拌反应18小时，其后，加入25μL 10μM SH‑A15搅拌2小时来封闭还有活性位点的银纳米粒子，122μL 0.01M PBS(pH 7.4)加入溶液反应6h，然后21μL 2M NaCl加入溶液，3h后重复将21μL 2M NaCl加入溶液；12h后，26μL 2M NaCl加入溶液，3h后重复将26μL 2M NaCl加入溶液；48小时后，溶液在14℃、15000rpm下离心15min，将沉淀分散在1mL 0.2M PBS+；探针B的合成：25μL 10μM DNA‑B、25μL 10μM DNA‑hemin缓慢加入1mL银纳米粒子溶液中，常温下缓慢搅拌反应18小时，其余步骤同探针A的合成；步骤S3，标准曲线的建立：将不同浓度的CRP标准溶液8μL以及其对应的2μg/mLbiotin‑Ab28μL分别滴到不同传感池中反应15min，用清洗缓冲液冲洗并干燥后，依次将8μL 2μg/mL链霉亲和素、4μL探针A、4μL探针B滴到各传感池，分别温育15min、30min、30min，冲洗干燥，最后，传感池中加入8μL化学发光底物，检测发光强度，建立CRP浓度与发光强度标准曲线；步骤S4，样品测定：将8μL含有CRP的待测样品加入到传感池中，依步骤S3方法操作，检测发光强度，根据发光强度及前述建立的CRP浓度与发光强度标准曲线计算得出样品中CRP浓度。 |
| 所属类别： | 发明专利 |
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