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原文传递一种检测β-内酰胺类抗生素的电化学方法

专利名称：	一种检测β-内酰胺类抗生素的电化学方法
摘要：	本发明公开了一种检测β‑内酰胺类抗生素的电化学方法。特点是玻碳电极表面采用聚亚甲基蓝、新德里金属‑β‑内酰胺酶‑1(NDM‑1酶)和戊二醛共同修饰，其制备方法包括裸电极活化；亚甲基蓝电聚合；工作电极制备，将4μL酶和2μL 1.0％的戊二醛混匀滴加于电极表面，晾干；将其置于青霉素钠、氨苄青霉素溶液中利用差分脉冲伏安法检测，得到线性范围分别为0.001ng‑10μg和0.01ng‑10μg，检出限分别为0.0057ng mL^‑1、0.011ng mL^‑1。优点是灵敏度高、检测限低、廉价、操作简单、可重复利用，可应用于β‑内酰胺类抗生素的检测，为β‑内酰胺类抗生素的检测提供了一种具有良好前景的技术。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	吉林;22
申请人：	吉林大学
发明人：	王虹苏;罗瑞平;牛效迪;修毅;朱丽;郭玲;韩保庆;黄延军
专利状态：	有效
申请号：	CN201811199695.5
公开号：	CN109342531A
代理机构：	长春市恒誉专利代理事务所(普通合伙) 22212
代理人：	李荣武
分类号：	G01N27/327(2006.01)I;G;G01;G01N;G01N27
申请人地址：	130012 吉林省长春市前进大街2699号
主权项：	1.一种检测β‑内酰胺类抗生素的电化学方法，其特征在于：所述的工作电极采用电聚合亚甲基蓝、新德里金属‑β‑内酰胺酶‑1(NDM‑1酶)和粘合剂戊二醛共同修饰玻碳电极表面，作为检测载体其方法如下所述：步骤一、玻碳电极的打磨：首先在麂皮上分别撒上少量1μm，0.3μm和0.05μm的抛光粉(Al2O3)，将玻碳电极先在1μm抛光粉上打磨，用去离子水清洗玻碳电极表面；接着将玻碳电极在0.3μm抛光粉上打磨，用去离子水清洗玻碳电极表面；最后将玻碳电极在0.05μm抛光粉上打磨，用去离子水清洗电极表面；然后将电极移入超声水浴中，依次用蒸馏水，乙醇和蒸馏水清洗2min，室温下晾干；步骤二、玻碳电极的活化：将步骤一中打磨好的玻碳电极放入pH＝6的磷酸盐缓冲液中，构建三电极结构(铂丝电极作为对电极，银氯化银电极作为参比电极，玻碳电极作为工作电极)，利用辰华电化学工作站将电极活化20圈，方法为循环伏安法，条件为：起始电位‑0.6V，最高电位2V；步骤三、亚甲基蓝的电聚合：将步骤二中活化的玻碳电极置于含有10mM亚甲基蓝pH＝6的缓冲液中，利用辰华电化学工作站扫描20圈，将亚甲基蓝聚合到活化后的玻碳电极的表面；方法为循环伏安法，条件为：起始电位‑0.8V，最高电位0.6V；用去离子水清洗玻碳电极，并将电极置于装有蒸馏水的烧杯中10min以除去表面未被聚合的亚甲基蓝单体，用蒸馏水冲洗电极表面，在室温下晾干；步骤四、固载NDM‑1酶的工作电极的制备：取4μL NDM‑1酶和2μL质量分数为1.0％的戊二醛混合均匀，将6μL混合物滴涂于步骤三中制备的聚亚甲基蓝修饰的玻碳电极表面，将电极置于4℃冰箱中晾干12h；用缓冲液冲洗电极表面以除去表面未被固定的酶；步骤五、抗生素的检测：将步骤四中制备的固载NDM‑1酶的玻碳电极浸入含有抗生素(青霉素钠、氨苄青霉素)的溶液中检测，检测方法为差分脉冲伏安法，条件为：起始电位‑0.6V，最高电位0.2V。
所属类别：	发明专利