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一种烟草内酶活的检测方法
| 专利名称： | 一种烟草内酶活的检测方法 |
| 摘要： | 本发明是一种烟草内生物酶活的检测方法，包括多酚氧化酶、过氧化物酶、淀粉酶、蛋白酶。在传统萃取和洗脱等方式制备粗酶基础上加入等体积的氯仿/异戊醇（24：1）或者Folch试剂抽提粗酶制剂，最后混合液过脱盐柱（柱体积：5mL，一般上样量≤10%柱体积效果最好，不可超过25%的柱体积），用平衡液洗脱，收集洗脱液，然后测定各管洗脱液的OD280判断蛋白质所在的位置，通过传统分光光度法检测酶活性。此方法建立了一种简便、稳定、高效的生物酶提取方法。本发明的提取方法不仅可应用于烟草生物酶的提取，还可以用于茶叶、落叶等其他陈化植物中生物酶的提取。 |
| 专利类型： | 发明专利 |
| 国家地区组织代码： | 云南;53 |
| 申请人： | 云南中烟工业有限责任公司 |
| 发明人： | 吴丽君;段如敏;郑晓丹;朱杰;杨德中;王毅;宋鹏飞;马永凯;魏云林;孙万万 |
| 专利状态： | 有效 |
| 申请号： | CN201811420237.X |
| 公开号： | CN109406427A |
| 代理机构： | 昆明正原专利商标代理有限公司 53100 |
| 代理人： | 金耀生 |
| 分类号： | G01N21/31(2006.01)I;G;G01;G01N;G01N21 |
| 申请人地址： | 650231 云南省昆明市红锦路367号 |
| 主权项： | 1.一种烟草内生物酶活的检测方法，其特征在于：包括以下步骤：步骤1，检测过程中粗酶的提取：液氮研磨至粉末状,称取1g烟叶粉末，移至15mL的离心管中，加入10mLPBS， pH7.0 ,0.1M冰浴放置30min，再加入0.5μm玻璃珠,震荡10min，震荡1min,停1min，12,000 rcf、 4℃离心10min，加入与粗酶液等体积的氯仿和异戊醇，两者比例为24：1，或者加入与粗酶液等体积的Folch试剂，缓慢摇晃混匀10‑15min, 6,000 rcf、 4℃离心10min，取上清，吸取水相，置冰上待测酶活性；步骤2，酶活测定：根据步骤1制备的粗酶，用分光光度法分别测定烟草内多酚氧化酶、过氧化物酶、淀粉酶、蛋白酶的活性。 |
| 所属类别： | 发明专利 |
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