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原文传递基于自组装介晶杂化物的自增强luminol-DBAE体系对卵巢癌标记物的检测

专利名称：	基于自组装介晶杂化物的自增强luminol-DBAE体系对卵巢癌标记物的检测
摘要：	本发明公开一种基于自组装介晶杂化物的自增强luminol‑DBAE体系对卵巢癌标记物的检测。其特点在于DBAE被首次用作luminol的共反应试剂，制备一种自增强的luminol‑DBAE体系。与传统的luminol‑H₂O₂体系相比，luminol‑DBAE体系具有更稳定、更高效的电致化学发光性能。借助于自组装介晶杂化物大的比表面积，成功负载大量的发光试剂luminol和共反应试剂DBAE，TiO₂ MCs@rGO拥有优异的导电性，加快了电子在电极表面的转移，极大地提高电致化学发光强度。以具有多孔结构的NiCo₂O₄纳米片和良好导电性的聚合物作为传感基底，在最佳的实验条件下，实现对卵巢癌标记物HE4的较高灵敏、较高稳定性检测。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	福建;35
申请人：	福建师范大学
发明人：	戴宏;任卉竹;房丹丹;高利红;郑祥钦
专利状态：	有效
申请号：	CN201811300784.4
公开号：	CN109406783A
代理机构：	福州智理专利代理有限公司 35208
代理人：	王义星
分类号：	G01N33/574(2006.01)I;G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	350108 福建省福州市闽侯县上街镇学园路福建师大旗山校区福建师大科研处
主权项：	1.一种基于自组装介晶杂化物为载体的自增强luminol‑DBAE体系对卵巢癌标记物的检测，其特征在于，包括以下步骤：（1）玻碳电极（GCE）首先在铺有氧化铝粉末的麂皮上机械打磨抛光，用二次水洗去表面残留粉末，再移入超声水浴中清洗，直至清洗干净，最后依序用乙醇，稀酸和水彻底洗涤；（2）取500 uL 4 mg/ml的NiCo2O4 纳米片 (NiCo2O4 NS) 与500 uL 10 mM的巯基乙胺在超声作用下混合均匀，将得到的均质溶液在室温下机械振荡5 h，经离心、洗涤，再分散得到表面带有‑NH2的NiCo2O4 NS，接着，将得到的溶液与PEDOT/PSS导电高聚物混合，室温下搅拌5 h, 得到NiCo2O4 NS/PEDOT/PSS复合物，滴加3 uL该复合物于处理过的玻碳电极表面，红外灯下烘干，冷却至室温，得到NiCo2O4 NS/PEDOT/PSS修饰电极；（3）滴加5 uL 5 wt.% 戊二醛于步骤（2）所制得的电极界面，并在4 °C冰箱中孵育30 min，然后，滴加5 μL浓度为4.2 ug/mL人附睾蛋白4抗体（Ab1）溶液于修饰的电极界面并在4 °C冰箱中孵育40 min,用去离子水洗去多余的试剂，制得Ab1/PEDOT/PSS/NiCo2O4 NS修饰玻碳电极；（4）取体积比为1:1的5 mg/mL自组装介晶杂化物（TiO2 MCs@rGO）溶液与50 mM N,N‑二乙醇胺（DBAE）在室温下混合震荡10 h，洗涤、离心制得TiO2 MCs@rGO@DBAE复合物；然后将上述复合物重新分散在去离子水中,再加入100 uL巯基苯甲酸（4‑MBA）, 室温下搅拌40 min, 通过Ti‑S 键，4‑MBA自组装到TiO2 MCs@rGO@DBAE复合物上；随后，向所获得的溶液中注入浓度比为2:1的1‑(3‑二甲氨基丙基)‑3‑乙基碳二亚胺盐酸盐（EDC）及N‑羟基琥珀酰亚胺（NHS），室温下振荡50 min，加入100 μL 1.0×10‑2 mol/L 鲁米诺 (luminol), 室温下反应 50 min，洗涤后，向获得的溶液中加入50 uL 的戊二醛和100 μL人附睾蛋白4兔多克隆抗体（Ab2）并在室温下振荡2 h, 经离心，洗涤，再分散后，向上述复合溶液中滴加50 μL1 wt% BSA 封闭非特异性吸附位点，离心，洗涤，再分散，最终制得TiO2 MCs@rGO@DBAE@luminol‑Ab2‑BSA复合物溶液，储存在4 °C冰箱中备用；（5）将步骤（3）制得的Ab1/PEDOT/PSS/NiCo2O4 NS修饰玻碳电极浸入不同浓度的人附睾蛋白4 (HE4）标准溶液中并4 °C冰箱中反应40 mim，随后，用去离子水冲洗电极表面，制得HE4/Ab1/PEDOT/PSS/NiCo2O4 NS修饰玻碳电极，然后滴加5 uL步骤（4）制备的电致化学发光探针（TiO2 MCs@rGO@DBAE@luminol‑Ab2‑BSA）复合物溶液于HE4/Ab1/PEDOT/PSS/NiCo2O4 NS修饰玻碳电极，在4 °C冰箱中孵育40 mim，用去离子水冲洗电极表面，制得TiO2 MCs@rGO@DBAE@luminol‑Ab2/HE4/Ab1/PEDOT/PSS/NiCo2O4 NS修饰玻碳电极。
所属类别：	发明专利