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多糖多酚植物组织双向电泳及高通量质谱分析的蛋白提取方法
| 专利名称： | 多糖多酚植物组织双向电泳及高通量质谱分析的蛋白提取方法 |
| 摘要： | 本发明公开了一种多糖多酚植物组织双向电泳及高通量质谱分析的蛋白提取方法，取1.0克棉花叶片加入质量比为7％聚乙烯吡咯烷酮粉末，再研磨成粉末，溶于3ml冰水溶液混匀，置于－20℃下，过夜沉淀，对沉淀进行洗涤和离心处理，再加入改进的裂解缓冲液溶液至沉淀完全溶解，再加入BPP提取缓冲液后进行离心处理，取出上层清液，再在上层清液中加入过饱和甲硫酸铵，置于－20℃的温度下，直至有蛋白沉淀析出，继续洗涤和离心处理。将洗涤过的沉淀室温风干后，再加入裂解缓冲液溶液使沉淀完全溶解，并将溶液储存于－80℃备用。本发明实现了棉花叶片总蛋白质的高效提取，获得的蛋白质纯度高，能同时满足双向电泳及高通量质谱分析两种蛋白组学分析手段。 |
| 专利类型： | 发明专利 |
| 国家地区组织代码： | 海南;46 |
| 申请人： | 海南师范大学 |
| 发明人： | 靳翔;王旭初;李鸿彬;竺丽萍;陶成诚;王斐 |
| 专利状态： | 有效 |
| 申请号： | CN201811224483.8 |
| 公开号： | CN109443866A |
| 代理机构： | 广州德伟专利代理事务所(普通合伙) 44436 |
| 代理人： | 黄浩威 |
| 分类号： | G01N1/28(2006.01)I;G;G01;G01N;G01N1 |
| 申请人地址： | 570100 海南省海口市龙昆南路99号 |
| 主权项： | 1.一种多糖多酚植物组织双向电泳及高通量质谱分析的蛋白提取方法，其特征在于，包括以下步骤：S1取棉花叶片加入聚乙烯吡咯烷酮粉末于液氮中研磨成粉末，其中聚乙烯吡咯烷酮粉末的含量为聚乙烯吡咯烷酮粉末和棉花叶片总质量的7％；S2将步骤S1所得的粉末溶于冰水溶液混匀，置于－20℃下，沉淀12小时；S3取出步骤S2所得的沉淀，进行涡旋搅拌处理，并对沉淀进行离心处理；S4用预冷的洗涤剂洗涤步骤S3离心处理后的沉淀若干次，每次洗完后，对沉淀进行离心处理，撇除上层清液，将沉淀于室温下风；S5在步骤S4风干后的沉淀中加入裂解缓冲液溶液至沉淀完全溶解，将溶解后的沉淀转移到新的离心管中；S6在步骤S5盛有溶液的离心管中加入BPP提取缓冲液，室温涡旋搅拌后，再进行离心处理；S7将在步骤S6盛有混合液的离心管中加入Tris－饱和苯酚和浓度为0.1％蛋白酶抑制剂，室温涡旋搅拌后，再进行离心处理，取出上层清液备用；S8在步骤S7离心所得的上层清液中加入BPP提取缓冲液，室温涡旋搅拌后，进行离心处理，再取上层清液，再在上层清液中加入过饱和甲硫酸铵，置于－20℃的温度下，直至有蛋白沉淀析出；S9对步骤S8所得的上层清液和蛋白沉淀进行离心处理，取出沉淀并将沉淀悬浮于提前预冷的洗涤剂中洗涤若干次，每次洗涤后再进行离心处理，分离上层清液和沉淀，取出沉淀备用；S10将步骤S9洗涤过的沉淀室温风干后，加入裂解缓冲液溶液至沉淀完全溶解，并将溶液储存于－80℃备用。 |
| 所属类别： | 发明专利 |
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