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原文传递液相色谱串联质谱同步检测植物油料多酚的方法

专利名称：	液相色谱串联质谱同步检测植物油料多酚的方法
摘要：	本发明提供液相色谱串联质谱同步检测植物油料多酚的方法,将磁性固相萃取技术与液相色谱串联质谱技术相结合，用于检测植物油料中的酚类化合物，所述酚类化合物为2‑(4‑羟苯基)乙醇、肉桂酸、对香豆酸、2‑羟基肉桂酸、香草酸、咖啡酸、阿魏酸、丁香酸、芥子醇、芥子酸、反式白藜芦醇、黄豆苷元、芹黄素、染料木素、儿茶素、表儿茶素、芝麻素、黄豆苷、染料木苷。本发明基于Fe3O4‑RGO复合材料，利用磁固相萃取法，结合液相色谱串联质谱检测，可实现植物油料中19种酚类化合物的检测分析。该方法高效、灵敏、稳定，适用于植物油料中酚类化合物同步检测。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	湖北;42
申请人：	中国农业科学院油料作物研究所
发明人：	张良晓;李培武;郎呼呼;喻理;毛劲;马飞;王秀嫔;张奇;张文
专利状态：	有效
申请日期：	2018-12-14T00:00:00+0800
发布日期：	2019-05-10T00:00:00+0800
申请号：	CN201811532659.6
公开号：	CN109738562A
代理机构：	北京路浩知识产权代理有限公司
代理人：	王文君;黄爽
分类号：	G01N30/88(2006.01);G;G01;G01N;G01N30
申请人地址：	430062 湖北省武汉市武昌区徐东2路2号
主权项：	1.液相色谱串联质谱同步检测植物油料多酚的方法，其特征在于，所述方法是将磁性固相萃取技术与液相色谱串联质谱技术相结合，用于检测植物油料中的酚类化合物，所述酚类化合物选自2-(4-羟苯基)乙醇、肉桂酸、对香豆酸、2-羟基肉桂酸、香草酸、咖啡酸、阿魏酸、丁香酸、芥子醇、芥子酸、反式白藜芦醇、黄豆苷元、芹黄素、染料木素、儿茶素、表儿茶素、芝麻素、黄豆苷、染料木苷中的至少一种；所述方法包括以下步骤： 1)样本的制备：将待测样品粉碎后配制成溶液，向装有待测样品溶液的反应管中加入四氧化三铁-石墨烯材料进行目标物的富集，在管壁外用磁铁吸附固体，弃液体，残留固体去杂后用解析剂进行洗脱，离心或过滤收集液体，将液体转移至离心管中，氮吹干后复溶，完成样本的制备； 2)标准品溶液的制备：配制不同浓度的各酚类化合物的标准品溶液； 3)用液相色谱串联质谱检测各标准品溶液，以标准品溶液的浓度作为横坐标，以质谱检测得到的标准品溶液信号强度作为纵坐标，分别绘制各酚类化合物的标准曲线； 4)按照步骤3)相同条件检测待测样品溶液样本中各酚类化合物的信号强度，将其代入上述标准曲线进行计算，得到待测样品溶液中各目标物的浓度，实现对植物油料中所含酚类化合物的同步定量检测。 2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1)所述解析剂为甲醇，优选为含有体积分数0.1％甲酸的甲醇。 3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1)中氮吹干后用甲醇复溶，步骤2)中用甲醇配制各标准品溶液。 4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1)具体为：称取1g待测样品于离心管中，加入体积分数70％的甲醇水溶液5mL，样品浸泡24h后于室温下超声30min，然后8000rpm离心10min；取100μL上清液氮吹干后，用2mL的体积分数0.5％的甲醇水溶液复溶；然后向其中加入4mg四氧化三铁-石墨烯材料，涡旋60s；在管壁外用磁铁吸附固体，弃液体；向残留固体中加入1mL石油醚清洗去杂，在管壁外用磁铁吸附固体，弃液体；向残留固体中加入6mL含有体积分数0.1％甲酸的甲醇进行洗脱，室温下超声5min，离心或过滤收集液体，将液体转移至离心管中，氮吹干后用1mL甲醇复溶，经0.22μm有机膜过滤后等待上机测试。 5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤3)中色谱条件如下：液相色谱柱为Hypersil Gold C18反相色谱柱，100mm×2.1mm，3.0μm i.d.；流动相A：含有体积分数0.01％乙酸的甲醇，流动相B：体积分数0.01％的乙酸水溶液，梯度洗脱程序如下；进样量3μL，流速200μL/min，柱温30℃； 6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤3)中质谱条件如下：采用电喷雾离子源ESI；SRM全扫模式；扫描方式为正离子模式，喷雾电压为3500V，扫描时间为0.2s；扫描方式为负离子模式，喷雾电压为-4000V，扫描时间为0.05s，毛细管温度330℃，鞘气为N2，35units，辅气为N2，5units，碰撞气为Ar，1.0mTorr。 7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤3)中各酚类化合物在液相色谱中的保留时间，以及各酚类化合物在质谱中所产生的检测信号的母离子和子离子的质荷比分别如下： 8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，各酚类化合物的定量检测的线性范围、检出限及定量限分别如下： 9.根据权利要求1-8任一项所述的方法，其特征在于，所述植物油料选自芝麻、花生、大豆。 10.根据权利要求1-8任一项所述的方法，其特征在于，所述四氧化三铁-石墨烯材料的制备方法如下： (1)称取2.0g石墨粉于46mL浓H2SO4中，冰水浴搅拌30min后，加入1.0g NaNO3混合均匀，将6.0g KMnO4缓慢地添加到上述混合物中保持2h，加热到35℃反应2h；当溶液颜色由深绿色变成褐色时，加入90mL超纯水；再将溶液加热至98℃，加入280mL超纯水和30％H2O2 10mL，磁力搅拌60min得到初产物；将初产物在8000rpm下离心分离，分别用超纯水和5％盐酸溶液洗涤沉淀3次，真空干燥后获得氧化石墨烯； (2)将40mL乙二醇加入到干燥的烧杯中，加入0.2g上述制备的氧化石墨烯，室温下超声搅拌使材料完全溶解；加入1.8g乙酸钠和0.7g氯化铁，搅拌30min后使反应物混合均匀，将反应浆料转移至100mL聚四氟乙烯内胆中，反应釜加压密封；将反应釜置于高温箱中于200℃反应12h，反应结束后自然冷却至室温，开盖取出产物，用超纯水和无水乙醇反复洗涤5次后，通过真空冷冻干燥肼于-48℃冷冻48h得到终产物，研磨成粉末状备用。
所属类别：	发明专利