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1.一种检测黑莓种子中天然维生素E含量的测定方法,其特征在于包括以下步骤:(1)称取:按重量g计,取种子的冻干粉0.5g,精密称定;(2)超声提取:加入30mL正己烷提取剂,30℃超声提取40min,将上清液离心收集;(3)重复步骤(2)1~2次;(4)浓缩:将上清液收集,在旋转蒸发器中,浓缩至干,去除正己烷,即得样品提取物;(5)溶解:将样品提取物加入50mL乙腈溶解,准备测定;(6)测定:高效液相色谱测定,采用C18色谱柱:ODS柱(250×4.6 mm, 5 μm),柱温控制在25℃,流动相:甲醇:水=(98:2v/v),等度洗脱15min,流速控制在1mL/min,二级管阵列检测器检查波长300nm,进样量为20µL;(7)标准品溶液的制备:选取Simga公司的维生素E作为标准品,制成浓度为:2.5, 5, 10, 20, 40, 80μg/ml的标准品溶液,主要以α‑生育酚,β‑生育酚,γ‑生育酚,δ‑生育酚标准样品的保留时间作为定性依据,各所测样品中与标样保留时间一致的色谱峰被认为是α‑生育酚,β‑生育酚,γ‑生育酚,δ‑生育酚,其中β‑生育酚与 γ‑生育酚保留时间相同,由于β‑生育酚在常温下极其不稳定,所以在实验操作中以 γ‑生育酚代替(β+γ)‑生育酚测定;(8)高效液相色谱测定法:不同浓度的标准品溶液分别以20进样,测定300nm波长下维生素E的峰面积,以所得各标准对照品峰面积为纵坐标,各对应标准品为横坐标分别做标准曲线,得到300nm波长下维生素E的峰面积,根据各自的标准曲线计算样品提取液中维生素E的含量,并结合黑莓种子样品的质量,经计算得到维生素E的含量。 |