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原文传递胱抑素C化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法

专利名称：	胱抑素C化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法
摘要：	本发明涉及一种胱抑素C化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法，属于试剂盒技术领域。解决了现有技术中胱抑素C的检测方法样本需求量大、存在稀有重金属污染风险的技术问题。本发明的试剂盒，包括R1试剂、R2试剂和R3试剂；R1试剂包含质量百分浓度为0.02％～1％的链霉亲和素磁颗粒和缓冲液Ⅰ；R2试剂包括浓度为0.1～1.0μg/mL的化学发光标记物标记的胱抑素C抗体和缓冲液Ⅱ；R3试剂包括浓度为0.7～2.0μg/ml的偶联标记物标记的胱抑素C抗体和缓冲液Ⅲ。该试剂盒具有灵敏度高、准确定量、无放射性风险及样本需求量少等优点。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	吉林;22
申请人：	迪瑞医疗科技股份有限公司
发明人：	张旭东;鲁海冰;高威;孙成艳;何浩会
专利状态：	有效
申请日期：	2019-04-17T00:00:00+0800
发布日期：	2019-08-02T00:00:00+0800
申请号：	CN201910308690.X
公开号：	CN110082519A
代理机构：	长春众邦菁华知识产权代理有限公司
代理人：	王莹
分类号：	G01N33/53(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	130103 吉林省长春市高新区宜居路3333号
主权项：	1.胱抑素C化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，包括R1试剂、R2试剂和R3试剂；所述R1试剂包含链霉亲和素磁颗粒和缓冲液Ⅰ，R1试剂中链霉亲和素磁颗粒的质量百分浓度为0.02％～1％；所述R2试剂包括化学发光标记物标记的胱抑素C抗体和缓冲液Ⅱ，R2试剂中化学发光标记物标记的胱抑素C抗体的浓度为0.1～1.0μg/mL；所述R3试剂包括偶联标记物标记的胱抑素C抗体和缓冲液Ⅲ，R3试剂中偶联标记物标记的胱抑素C抗体的浓度为0.7～2.0μg/ml。 2.根据权利要求1所述的胱抑素C化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，所述缓冲液Ⅰ、缓冲液Ⅱ和缓冲液Ⅲ均为含有50～200mM的缓冲盐、0.05％～0.1％的表面活性剂和0.01％～0.1％的防腐剂，pH为6.5～7.2的缓冲液。 3.根据权利要求2所述的胱抑素C化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，所述缓冲液Ⅰ、缓冲液Ⅱ和缓冲液Ⅲ分别还含有0.05％～0.1％的稳定剂，所述稳定剂为牛血清白蛋白。 4.根据权利要求2所述的胱抑素C化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，所述表面活性剂为吐温-20，防腐剂为NaN3或ProClin300，缓冲盐为tris-HCl、PB、MES或HEPES。 5.根据权利要求1所述的胱抑素C化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，所述链霉亲和素磁颗粒的粒径为0.05～3μm。 6.根据权利要求1所述的胱抑素C化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，所述化学发光标记物标记的胱抑素C抗体中，胱抑素C抗体与化学发光标记物的标记摩尔比为1:(3～20)；化学发光标记物为吖啶酯、鲁米诺、异鲁米诺或三联吡啶钌。 7.根据权利要求1所述的胱抑素C化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，所述偶联标记物标记的胱抑素C抗体中，胱抑素C抗体与偶联标记物的标记摩尔比为1:(5～20)；偶联标记物为生物素或抗原。 8.根据权利要求1所述的胱抑素C化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，该试剂盒中还包括校准品；所述校准品包括浓度分别为0.00mg/L、0.25mg/L、1.00mg/L、2.00mg/L、4.00mg/L、6.50mg/L和10.00mg/L的胱抑素C蛋白溶液。 9.根据权利要求1所述的胱抑素C化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，该试剂盒中还包括化学发光预激发液A和化学发光激发液B；所述化学发光激发液A为硝酸溶液和过氧化氢溶液；所述化学发光激发液B为氢氧化钠溶液。 10.权利要求1～9任何一项所述的胱抑素C化学发光免疫检测试剂盒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一、制备R1试剂将链霉亲和素磁颗粒溶液加入TBST溶液中，充分混匀后，放置于磁分离器上，直至上清无混浊，弃上清，留取磁颗粒，使用缓冲液Ⅰ清洗磁颗粒后，再用缓冲液Ⅰ配成磁颗粒质量百分浓度为0.02％～1％的固相试剂，即为R1试剂；步骤二、制备R2试剂先将胱抑素C抗体放入离心管中，保证胱抑素C抗体位于离心管底部位置后加入碳酸缓冲液，充分混匀，混匀后加入化学发光标记物的DMF溶液，用离心机室温条件下离心0.5～1min；然后将离心管用封口膜密封后放入避光暗盒中，将暗盒放入气浴恒温振荡器中混匀，取出，加入赖氨酸封闭液，再放入气浴恒温振荡器中混匀并封闭1～2h；再将封闭好的胱抑素C抗体上葡聚糖凝胶G250柱纯化，用磷酸缓冲液洗脱，分别收集；最后将收集好的胱抑素C抗体溶液用缓冲液Ⅱ稀释至终浓度为0.1～1.0μg/mL，即为R2试剂；步骤三、制备R3试剂取胱抑素C抗体，用pH为6.0～6.5的TRIS缓冲液透析纯化后加入已活化的长链磺化生物素，2～8℃反应1～3h，再转入室温继续反应10～30min，最后加入赖氨酸反应10～30min，反应液脱盐柱纯化，加入缓冲液Ⅲ稀释至终浓度为0.7～2.0μg/ml，即为R3试剂。
所属类别：	发明专利