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原文传递银纳米簇基复合材料的制备方法以及基于该复合材料的核酸检测方法

专利名称：	银纳米簇基复合材料的制备方法以及基于该复合材料的核酸检测方法
摘要：	本发明属于生物检测技术领域，具体涉及一种银纳米簇基复合材料的制备方法以及基于该复合材料的核酸检测方法。本发明提供的银纳米簇基复合材料的制备方法，通过与土伦试剂反应，最终形成低聚团簇和银纳米粒子胶体，有效解决银纳米簇易聚集的问题。本发明提供的核酸检测方法，基于CHA反应，一个靶序列促进多组发夹结构H2链与发夹结构H1链结合，每个发夹结构H2链预先由一个标签1标定，形成H1‑H2功能化的磁珠后，再结合标签2功能化的酶分子，通过酶分子催化底物生成过氧化氢以催化银纳米簇基复合材料反应即可判定靶序列的含量，提高了核酸检测的灵敏度。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	江苏;32
申请人：	中国科学院苏州生物医学工程技术研究所
发明人：	韩坤;李夷飞;李靖雯;蒋平;翟星帏
专利状态：	有效
申请日期：	2019-04-29T00:00:00+0800
发布日期：	2019-08-06T00:00:00+0800
申请号：	CN201910357225.5
公开号：	CN110095519A
代理机构：	北京远大卓悦知识产权代理事务所(普通合伙)
代理人：	韩飞
分类号：	G01N27/327(2006.01);G;G01;G01N;G01N27
申请人地址：	215163 江苏省苏州市高新区科技城科灵路88号
主权项：	1.一种银纳米簇基复合材料的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤(i)，向量子点材料中性溶液中加入土伦试剂，室温混合0.1～10小时，制备得到反应原液；步骤(ⅱ)，将步骤(i)所述反应原液在40～110℃加热0.1～10小时，降至室温，制备得到所述银纳米簇基复合材料。 2.根据权利要求1所述的银纳米簇基复合材料的制备方法，其特征在于，所述量子点材料的选自碳基量子点、半导体量子点中的至少一种。 3.一种利用权利要求1或2所述的银纳米簇基复合材料进行核酸检测的方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤(1)，根据靶序列设计与所述靶序列互补的发夹结构H1链以及与所述发夹结构H1链序列互补的发夹结构H2链；步骤(2)，将步骤(1)中的所述发夹结构H1链负载在磁珠上，得到H1链功能化的磁珠；步骤(1)中的所述发夹结构H2链标记有以与酶分子结合的功能化标签1，得到标签1标记的H2链；步骤(3)，先将所述靶序列与所述H1链功能化的磁珠混合，再加入所述标签1标记的H2链，所述靶序列催化所述标签1标记的H2链与所述H1链功能化的磁珠结合，然后磁分离，弃上清液，用缓冲液复溶，得到H1-H2双链功能化的磁珠；步骤(4)，向步骤(3)得到的所述H1-H2双链功能化的磁珠缓冲液中加入标签2功能化的所述酶分子，孵育，得到酶-磁珠复合物；步骤(5)，将权利要求1或2所述的银纳米簇基复合材料、与所述酶分子反应的底物以及步骤(4)中制备得到的所述酶-磁珠复合物混合，通过比色或荧光分析判断所述靶序列的浓度；其中，所述标签1和所述标签2为以通过共价键、结构特异性识别或主-客体相互作用任一方式特异性结合的一对分子标签。 4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，对所述发夹结构H1链和所述发夹结构H2链进行预处理：将所述发夹结构H1链和所述发夹结构H2链分别溶解于缓冲液中，40～100℃加热，加热时间不长于100分钟，之后降至室温。 5.根据权利要求3或4所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，所述H1链功能化的磁珠的制备方法为：将所述发夹结构H1链加至磁珠溶液中进行至少一次孵育。 6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述孵育的温度不高于100℃，所述孵育时间不长于40小时。 7.根据权利要求3或4所述的方法，其特征在于，步骤(3)中，所述混合的温度不高于100℃，所述混合的时间不长于20小时。 8.根据权利要求3或4所述的方法，其特征在于，步骤(4)中，所述孵育的温度不高于100℃，所述混合的时间为不长于10小时。 9.根据权利要求3或4所述的方法，其特征在于，所述酶分子为氧化酶或还原酶以与所述底物氧化或还原并产生过氧化氢分子。 10.根据权利要求3或4所述的方法，其特征在于，用于病毒RNA、microRNA、ctDNA核酸序列的检测。
所属类别：	发明专利