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原文传递一种检测肌红蛋白的核酸适配体荧光传感器及其构建方法

专利名称：	一种检测肌红蛋白的核酸适配体荧光传感器及其构建方法
摘要：	本发明公开了一种检测肌红蛋白的核酸适配体荧光传感器及其构建方法，属于分析检测技术领域。所述构建方法，包括：将修饰有淬灭基团的肌红蛋白核酸适配体和修饰有荧光基团的核酸适配体互补链加入缓冲体系中杂交，制得所述的核酸适配体荧光传感器。当加入肌红蛋白，核酸适配体与互补短链分离，与肌红蛋白结合，连有荧光基团的互补短链脱离连有淬灭基团的核酸适配体后，荧光基团的荧光得到恢复，其荧光恢复的强度与肌红蛋白的浓度成正比，由此可测定肌红蛋白的浓度。本发明采用价廉易制备的核酸适配体荧光传感器对肌红蛋白进行检测，可实现肌红蛋白的的精准检测。该方法设计简单、成本低、检测步骤少，操作简便，灵敏度高，选择性好。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	浙江;33
申请人：	嘉兴学院
发明人：	杨义文;李蕾;刘东奎;曾延波;王海龙;翟云云;张剑;路易霞
专利状态：	有效
申请日期：	2019-06-27T00:00:00+0800
发布日期：	2019-09-06T00:00:00+0800
申请号：	CN201910569564.X
公开号：	CN110208548A
代理机构：	杭州天勤知识产权代理有限公司
代理人：	韩聪
分类号：	G01N33/68(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	314001 浙江省嘉兴市越秀南路56号
主权项：	1.一种检测肌红蛋白的核酸适配体荧光传感器的构建方法，其特征在于，包括：将修饰有淬灭基团的肌红蛋白核酸适配体和修饰有荧光基团的核酸适配体互补链加入缓冲体系中杂交，制得所述的核酸适配体荧光传感器。 2.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述淬灭基团为4-[4-(二甲基氨基)苯基偶氮]苯甲酸，所述荧光基团为6-羧基荧光素。 3.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述肌红蛋白核酸适配体的碱基序列为5′-CCCTCCTTTCCTTCGACGTAGATCTGCTGCGTTGTTCCGA-3′，所述核酸适配体互补链的碱基序列为5′-GGAACAACGC-3′、5′-TCGGAACAAC-3′、5′-CGGAACAACG-3′、5′-GAACAACGCA-3′中的任意一个。 4.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述缓冲体系为磷酸盐缓冲溶液。 5.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于，杂交体系中修饰有淬灭基团的肌红蛋白核酸适配体的浓度为1-100nmol/L，修饰有荧光基团的核酸适配体互补链浓度为1-100nmol/L。 6.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于，杂交的条件为20-25℃下孵育1-100min。 7.如权利要求1-6任一项所述的构建方法制得的核酸适配体荧光传感器。 8.一种基于核酸适配体荧光传感器检测肌红蛋白的方法，其特征在于，包括以下步骤： (1)绘制标准曲线：在权利要求7所述的核酸适配体荧光传感器中，加入浓度呈梯度分布的肌红蛋白标准品溶液使体系内肌红蛋白浓度在0.1-5ng/mL，孵育，再测定各自的荧光强度值F，同时测定空白样品的荧光值F0，根据荧光强度变化值F-F0与肌红蛋白浓度绘制标准曲线； (2)未知样本检测：在权利要求7所述的核酸适配体荧光传感器中加入待测样本溶液，孵育，测定荧光强度变化值，根据标准曲线计算待测样本中肌红蛋白浓度。 9.如权利要求8所述的基于核酸适配体荧光传感器检测肌红蛋白的方法，其特征在于，所述孵育的条件为20-25℃下孵育1-100min。 10.如权利要求8所述的基于核酸适配体荧光传感器检测肌红蛋白的方法，其特征在于，荧光检测条件为测定体系在517nm处的荧光强度，激发波长为495nm。
所属类别：	发明专利