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原文传递一种用于检测人VEGF蛋白表达水平的体外试剂盒

专利名称：	一种用于检测人VEGF蛋白表达水平的体外试剂盒
摘要：	本发明提供了一种用于检测人VEGF蛋白表达水平的体外试剂盒，本发明提供的试剂盒中的人源化单克隆抗体能够很好地、特异性与VEGF抗原结合，具有高效检测VEGF相关疾病的辅助诊断作用。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	浙江;33
申请人：	浙江众意生物科技有限公司
发明人：	吕鹏辉
专利状态：	有效
申请日期：	2019-04-03T00:00:00+0800
发布日期：	2019-08-16T00:00:00+0800
申请号：	CN201910268089.2
公开号：	CN110133278A
代理机构：	杭州橙知果专利代理事务所(特殊普通合伙)
代理人：	李品
分类号：	G01N33/68(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	311100 浙江省杭州市余杭区兴国路503号1幢三层
主权项：	1.一种用于检测人VEGF蛋白表达水平的体外试剂盒，其特征在于，将VEGF抗体包被板制成固相抗体，往包被抗体的微孔中依次加入样品，再加入HRP标记的酶标液，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色，TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在终止液作用下转化为黄色，颜色深浅与VEGF抗原含量成正相关，利用酶标仪测定450nm波长下OD，通过标曲计算VEGF含量，所述检测试剂盒包含新型人源化VEGF单抗，所述VEGF抗体包括：包含SEQ ID NO:07的氨基酸序列的CDR-L1，和/或包含SEQ ID NO:08的氨基酸序列的CDR-L2，和/或包含SEQ ID NO:09的氨基酸序列的CDR-L3，和/或包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列的CDR-H1，和/或包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列的CDR-H2，和/或包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列的CDR-H3。 2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述抗体为单克隆抗体，可选地，所述抗体为特异性结合人VEGF的抗体片段，可选地，所述抗体为包含特异性结合人VEGF抗体片段的融合蛋白，可选地，所述抗体为鼠源抗体，可选地，所述抗体为人源化抗体，可选地，所述抗体为鼠源单克隆抗体。优选地，所述抗体为人源化单克隆抗体。 3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述抗体包含抗体重链可变区氨基酸序列包括如SEQ ID NO:23所示或与SEQ ID NO:24的氨基酸序列具有至少99％序列同一性的VH序列；可选地，所述抗体包含抗体轻链可变区氨基酸序列包括如SEQ ID NO:25所示或与SEQID NO:26的氨基酸序列具有至少99％序列同一性的VL序列；优选地，所述抗体重链恒定区氨基酸序列如SEQ ID NO:23所示，所述抗体轻链恒定区氨基酸序列如SEQ ID NO:24所示。 4.根据权利要求1-5所述任一试剂盒，其特征在于，所述抗体包含选自人抗体IgG1、IgG2、IgG3、IgG4的任一Fc端的氨基酸序列。 5.根据权利要求1-6所述的试剂盒，其特征在于，所述抗体的生产步骤包括：在培养基中和合适的培养条件下培养含有权利要求1-6所述抗体的宿主细胞，从培养基中或从所培养的宿主细胞中回收产生的抗体及其抗体片段。 6.根据权利要求1-5所述任一试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括酶标包被板、标品、标品缓冲剂、酶标液、样品稀释液、TMB显色剂、洗涤液、终止液。 7.根据权利要求7所述试剂盒，其特征在于，所述检测试剂盒可以用于辅助诊断癌症及眼内疾病。 8.根据权利要求8所述试剂盒，其特征在于，所述癌症包括但不限于白血病、淋巴瘤、骨髓瘤、脑肿瘤、头颈部鳞状细胞癌、非小细胞肺癌、鼻咽癌、食道癌、胃癌、胰腺癌、胆囊癌、肝癌、结直肠癌、乳腺癌、卵巢癌、宫颈癌、子宫内膜癌、子宫肉瘤、前列腺癌、膀胱癌、肾细胞癌、黑色素瘤。
所属类别：	发明专利