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原文传递用于从生物体液中富集或检测星形胶质细胞来源的外泌体的方法

专利名称：	用于从生物体液中富集或检测星形胶质细胞来源的外泌体的方法
摘要：	本发明公开了一种用于从生物体液中富集或检测星形胶质细胞来源的外泌体的方法。其中，富集星形胶质细胞来源的外泌体该方法包括以下步骤：(a)使含有星形胶质细胞来源的外泌体的生物体液接触抗GLT1抗体以形成免疫复合物，其中，生物体液是选自血液、血清、血浆、唾液和尿液中的一种或多种；以及(b)通过免疫复合物采用固相或液相的方法富集星形胶质细胞来源的外泌体。可检测星形胶质细胞来源的外泌体的生物标记物，用于辅助诊断、鉴别诊断和监测中枢神经系统疾病如，阿尔茨海默病、帕金森病、多系统萎缩、朊病毒病和神经系统肿瘤例如胶质瘤等，避免通过创伤性操作获取标记物。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	北京;11
申请人：	北京大学
发明人：	章京;于震维;兰国钰
专利状态：	有效
申请日期：	2018-02-09T00:00:00+0800
发布日期：	2019-08-16T00:00:00+0800
申请号：	CN201810136747.8
公开号：	CN110133272A
代理机构：	北京康信知识产权代理有限责任公司
代理人：	韩建伟;金田蕴
分类号：	G01N33/68(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	100191 北京市海淀区学院路38号
主权项：	1.一种用于从生物体液中富集星形胶质细胞来源的外泌体的方法，其特征在于，包括以下步骤： (a)使含有星形胶质细胞来源的外泌体的生物体液接触抗GLT1抗体以形成免疫复合物，其中，所述生物体液是选自血液、血清、血浆和唾液中的一种或多种；以及 (b)通过所述免疫复合物采用固相或液相的方法富集所述星形胶质细胞来源的外泌体。 2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(b)包括，通过所述免疫复合物将生物体液中的星形胶质细胞来源的外泌体结合于固相；从生物体液中分离固相结合的外泌体以富集星形胶质细胞来源的外泌体。 3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，将在步骤(a)中的所述抗GLT1抗体固定在所述固相上。 4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述方法进一步包括从所述固相洗脱结合的所述外泌体的步骤(c)。 5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述抗GLT1抗体为经过标记的抗体，步骤(b)包括，通过流式细胞仪富集所述星形胶质细胞来源的外泌体。 6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述抗GLT1抗体为经过荧光标记物、同位素、酶标记物、化学发光剂或量子点标记的抗体。 7.一种抗GLT1抗体在制备用于在生物体液中检测神经系统疾病的星形胶质细胞来源的生物标记物的制剂中的用途，其特征在于，包括以下步骤： (a)使含有星形胶质细胞来源的外泌体的生物体液接触抗GLT1抗体以形成免疫复合物，其中，所述生物体液是选自血液、血清、血浆、唾液和尿液中的一种或多种；以及 (b)确定所述星形胶质细胞来源的生物标记物的水平。 8.根据权利要求7所述的用途，其特征在于，所述生物标记物是核酸、蛋白质、脂类或星形细胞来源外泌体本身。 9.根据权利要求8所述的用途，其特征在于，步骤(b)包括： (b1)通过所述免疫复合物将所述生物体液中的星形胶质细胞来源的外泌体结合于固相； (b2)从所述生物体液中分离所述固相结合的外泌体；以及 (b3)确定步骤(b2)分离得到的所述固相结合的外泌体的所述星形胶质细胞来源的生物标记物的水平。 10.根据权利要求8所述的用途，其特征在于，当所述生物标记物是星形细胞来源外泌体本身，所述抗GLT1抗体为经过标记的抗体，步骤(b)包括：借助于所述标记直接检测所述生物体液中星形细胞来源外泌体；优选的，所述抗GLT1抗体为经过荧光标记物、同位素、酶标记物、化学发光剂、量子点或胶体金标记的抗体；优选的，通过粒度分析仪、伽马计数器或小动物活体成像仪直接检测所述生物体液中星形细胞来源外泌体的浓度、粒径分布及组织分布；更优选的，所述荧光标记物为荧光标记物Qdot525、Qdot545、Qdot565、Qdot585、Qdot605、Qdot625、Qdot655、Qdot705或Qdot800。 11.根据权利要求8所述的用途，其特征在于，所述神经系统疾病包括帕金森病、阿尔茨海默病、朊病毒病和神经系统肿瘤；当所述神经系统疾病是帕金森病，所述生物标记物是α-突触核蛋白、磷酸化的α-突触核蛋白、星形细胞来源外泌体的浓度与粒径分布；当所述神经系统疾病是阿尔茨海默病，所述生物标记物是tau蛋白和磷酸化的tau蛋白；当所述神经系统疾病是朊病毒病，所述生物标记物是朊病毒蛋白；当所述神经系统疾病是神经系统肿瘤，所述神经系统肿瘤包括胶质瘤，所述生物标记物是星形细胞来源外泌体内的生物标记物水平和星形细胞来源外泌体的浓度与粒径分布，其中，所述星形细胞来源外泌体内的生物标记物包括α-突触核蛋白、α-突触核蛋白寡聚体、PS129、tau蛋白、磷酸化的tau蛋白和Abeta蛋白。 12.一种抗GLT1抗体在制备用于在受试者中检测神经系统疾病或肿瘤的制剂中的用途，其特征在于，包括以下步骤： (a)使含有星形胶质细胞来源的外泌体的生物体液接触抗GLT1抗体以形成免疫复合物，其中，所述生物体液是选自血液、血清、血浆、唾液和尿液中的一种或多种；以及 (b)确定所述星形胶质细胞来源的生物标记物的水平，并与来自没有所述神经系统疾病的受试者的对照水平比较，在所述受试者中来自所述星形胶质细胞来源的外泌体的所述生物标记物的水平差异显著表明所述受试者患有所述神经系统疾病。 13.根据权利要求12所述的用途，其特征在于，所述生物标记物是核酸、蛋白质、脂类或星形细胞来源外泌体本身。 14.根据权利要求13所述的用途，其特征在于，步骤(b)包括： (b1)通过所述免疫复合物将所述生物体液中的星形胶质细胞来源的外泌体结合于固相； (b2)分离所述固相结合的外泌体；以及 (b3)确定步骤(b2)分离得到的所述固相结合的外泌体的所述星形胶质细胞来源的生物标记物的水平，并与来自没有所述神经系统疾病的受试者的对照水平比较，在所述受试者中来自所述星形胶质细胞来源的外泌体的所述生物标记物的水平差异显著表明所述受试者患有所述神经系统疾病。 15.根据权利要求13所述的用途，其特征在于，当所述生物标记物是星形细胞来源外泌体本身，所述抗GLT1抗体为经过标记的抗体，步骤(b)包括：借助于所述标记直接检测所述生物体液中星形细胞来源外泌体；优选的，所述抗GLT1抗体为经过荧光标记物、同位素、酶标记物、化学发光剂、量子点或胶体金标记的抗体；优选的，通过粒度分析仪、伽马计数器或小动物活体成像仪直接检测所述生物体液中星形细胞来源外泌体的浓度、粒径分布及组织分布；更优选的，所述荧光标记物为荧光标记物Qdot525、Qdot545、Qdot565、Qdot585、Qdot605、Qdot625、Qdot655、Qdot705或Qdot800。 16.根据权利要求13所述的用途，其特征在于，所述神经系统疾病包括帕金森病、阿尔茨海默病、朊病毒病和神经系统肿瘤；当所述神经系统疾病是帕金森病，所述生物标记物是α-突触核蛋白、磷酸化的α-突触核蛋白和星形细胞来源外泌体的浓度与粒径分布；当所述神经系统疾病是阿尔茨海默病，所述生物标记物是tau蛋白和磷酸化的tau蛋白；当所述神经系统疾病是朊病毒病，所述生物标记物是朊病毒蛋白；当所述神经系统疾病是神经系统肿瘤，所述神经系统肿瘤包括胶质瘤，所述生物标记物是星形细胞来源外泌体内的生物标记物水平和星形细胞来源外泌体的浓度与粒径分布，其中，所述星形细胞来源外泌体内的生物标记物包括α-突触核蛋白、α-突触核蛋白寡聚体、PS129、tau蛋白、磷酸化的tau蛋白和Abeta蛋白。 17.一种用于在生物体液中检测神经系统疾病的星形胶质细胞来源的生物标记物的装置，其特征在于，包括：外泌体富集模块，用于使含有星形胶质细胞来源的外泌体的生物体液接触抗GLT1抗体以形成免疫复合物，所述生物体液是选自血液、血清、血浆、唾液和尿液中的一种或多种；以及生物标记物水平确定模块，用于确定所述星形胶质细胞来源的生物标记物的水平。 18.根据权利要求17所述的装置，其特征在于，所述生物标记物是核酸、蛋白质、脂类或星形细胞来源外泌体本身。 19.根据权利要求18所述的装置，其特征在于，所述外泌体富集模块，用于使含有星形胶质细胞来源的外泌体的生物体液接触抗GLT1抗体以形成免疫复合物，通过所述免疫复合物将所述生物体液中的星形胶质细胞来源的外泌体结合于固相，并从所述生物体液中分离所述固相结合的外泌体；以及所述生物标记物水平确定模块，用于确定所述外泌体富集模块中分离得到的所述固相结合的外泌体的所述星形胶质细胞来源的生物标记物的水平。 20.根据权利要求18所述的装置，其特征在于，当所述生物标记物是星形细胞来源外泌体本身，所述外泌体富集模块中的抗GLT1抗体为经过标记的抗体，所述生物标记物水平确定模块借助于所述标记直接检测所述生物体液中星形细胞来源外泌体；优选的，所述抗GLT1抗体为经过荧光标记物、同位素、酶标记物、化学发光剂、量子点或胶体金标记的抗体；优选的，所述生物标记物水平确定模块通过粒度分析仪、伽马计数器或小动物活体成像仪直接检测所述生物体液中星形细胞来源外泌体的浓度、粒径分布及组织分布；更优选的，所述荧光标记物为荧光标记物Qdot525、Qdot545、Qdot565、Qdot585、Qdot605、Qdot625、Qdot655、Qdot705或Qdot800。 21.根据权利要求18所述的装置，其特征在于，所述神经系统疾病包括帕金森病、阿尔茨海默病、朊病毒病和神经系统肿瘤；当所述神经系统疾病是帕金森病，所述生物标记物是α-突触核蛋白、磷酸化的α-突触核蛋白和星形细胞来源外泌体的浓度与粒径分布；当所述神经系统疾病是阿尔茨海默病，所述生物标记物是tau蛋白和磷酸化的tau蛋白；当所述神经系统疾病是朊病毒病，所述生物标记物是朊病毒蛋白；当所述神经系统疾病是神经系统肿瘤，所述神经系统肿瘤包括胶质瘤，所述生物标记物是星形细胞来源外泌体内的生物标记物水平和星形细胞来源外泌体的浓度与粒径分布，其中，所述星形细胞来源外泌体内的生物标记物包括α-突触核蛋白、α-突触核蛋白寡聚体、PS129、tau蛋白、磷酸化的tau蛋白和Abeta蛋白。 22.一种用于在受试者中检测神经系统疾病的装置，其特征在于，包括：外泌体富集模块，用于使含有星形胶质细胞来源的外泌体的生物体液接触抗GLT1抗体以形成免疫复合物，所述生物体液是选自血液、血清、血浆、唾液和尿液中的一种或多种；以及比较模块，用于确定所述星形胶质细胞来源的生物标记物的水平，并且，与来自没有所述神经系统疾病的受试者的对照水平比较，在所述受试者中来自所述星形胶质细胞来源的外泌体的所述生物标记物的水平差异显著则输出所述受试者患有所述神经系统疾病的信息。 23.根据权利要求22所述的装置，其特征在于，所述生物标记物是核酸、蛋白质、脂类或星形细胞来源外泌体本身。 24.根据权利要求23所述的装置，其特征在于，所述外泌体富集模块，用于使含有星形胶质细胞来源的外泌体的生物体液接触抗GLT1抗体以形成免疫复合物，通过所述免疫复合物将所述生物体液中的星形胶质细胞来源的外泌体结合于固相，并从所述生物体液中分离所述固相结合的外泌体；以及所述比较模块，用于确定所述外泌体富集模块分离得到的所述固相结合的外泌体的所述星形胶质细胞来源的生物标记物的水平，并且，与来自没有所述神经系统疾病的受试者的对照水平比较，在所述受试者中来自所述星形胶质细胞来源的外泌体的所述生物标记物的水平差异显著则输出所述受试者患有所述神经系统疾病的信息。 25.根据权利要求23所述的装置，其特征在于，当所述生物标记物是星形细胞来源外泌体本身，所述外泌体富集模块中的抗GLT1抗体为经过标记的抗体，比较模块借助于所述标记直接检测所述生物体液中星形细胞来源外泌体，并且，与来自没有所述神经系统疾病的受试者的对照水平比较；优选的，所述抗GLT1抗体为经过荧光标记物、同位素、酶标记物、化学发光剂、量子点或胶体金标记的抗体；优选的，所述生物标记物水平确定模块通过粒度分析仪、伽马计数器或小动物活体成像仪直接检测所述生物体液中星形细胞来源外泌体的浓度、粒径分布及组织分布；更优选的，所述荧光标记物为荧光标记物Qdot525、Qdot545、Qdot565、Qdot585、Qdot605、Qdot625、Qdot655、Qdot705或Qdot800。 26.根据权利要求23所述的装置，其特征在于，所述神经系统疾病包括帕金森病、阿尔茨海默病、朊病毒病和神经系统肿瘤；当所述神经系统疾病是帕金森病，所述生物标记物是α-突触核蛋白、磷酸化的α-突触核蛋白和星形细胞来源外泌体的浓度与粒径分布；当所述神经系统疾病是阿尔茨海默病，所述生物标记物是tau蛋白和磷酸化的tau蛋白；当所述神经系统疾病是朊病毒病，所述生物标记物是朊病毒蛋白；当所述神经系统疾病是神经系统肿瘤，所述神经系统肿瘤包括胶质瘤，所述生物标记物是星形细胞来源外泌体内的生物标记物水平和星形细胞来源外泌体的浓度与粒径分布，其中，所述星形细胞来源外泌体内的生物标记物包括α-突触核蛋白、α-突触核蛋白寡聚体、PS129、tau蛋白、磷酸化的tau蛋白和Abeta蛋白。 27.GLT1作为星形胶质细胞来源的外泌体生物标记物的应用。 28.根据权利要求27所述的应用，其特征在于，所述应用包括：从生物体液中富集星形胶质细胞来源的外泌体、制备用于在生物体液中检测神经系统疾病的星形胶质细胞来源的生物标记物的制剂、在生物体液中检测神经系统疾病的星形胶质细胞来源的生物标记物和在受试者中检测神经系统疾病。
所属类别：	发明专利