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原文传递一种外泌体的富集方法

专利名称：	一种外泌体的富集方法
摘要：	本发明涉及一种外泌体富集方法及其在生物样品中外泌体快速富集中的应用。首先对生物样品差速离心处理或超滤处理，去除样品中的细胞类干扰；向上清液中加入PEG溶液，在低温下静置一段时间；将样品放置合适温度使成均匀溶液，在低速下离心，所得沉淀即为外泌体。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	辽宁;21
申请人：	中国科学院大连化学物理研究所
发明人：	张丽华;随志刚;杨开广;侯瑞;袁辉明;张玉奎
专利状态：	有效
申请日期：	2018-04-28T00:00:00+0800
发布日期：	2019-11-05T00:00:00+0800
申请号：	CN201810402324.6
公开号：	CN110411816A
代理机构：	沈阳科苑专利商标代理有限公司
代理人：	马驰
分类号：	G01N1/40(2006.01);G;G01;G01N;G01N1
申请人地址：	116023 辽宁省大连市沙河口区中山路457号
主权项：	1.一种外泌体的富集方法，其特征在于，包括如下步骤： 1)将生物样品进行预处理； 2)向步骤1)所得的生物样品中加入PEG溶液，以及加入或不加入有机试剂和/或盐溶液； 3)将步骤2)所得的溶液混合均匀，放置低温环境下静置冻结，然后将样品放置一定温度下融化使成均匀溶液； 4)将步骤3)所得的溶液将样品于低速下离心，所得沉淀即为外泌体。 2.按照权利要求1所述的富集方法，其特征在于：生物样品为细胞培养液，菌株培养液，组织培养液，及其各种体液样本及临床检测用液体检材，如血液、尿液、唾液、精液、胆汁、脑脊液、呼吸道清洗液中的一种或二种以上。 3.按照权利要求1所述的富集方法，其特征在于：生物样品的体积为1μL-100mL。 4.按照权利要求1所述的富集方法，其特征在于：生物样品进行预处理方法为：首先在200g-500g条件下离心3-15分钟，然后吸取上清液A；上清液A在2000g-5000g条件下离心10-30分钟，然后吸取上清液B；最后上清液B在10000g-20000g条件下离心0.5-3h或经过0.1-0.3微米的滤膜进行过滤，得所需要液体。 5.按照权利要求1所述的富集方法，其特征在于：所使用的PEG(聚乙二醇)，分子量为2000-50000Da，使其于体系中加入的终质量浓度为2-10％。 6.按照权利要求1或5所述的富集方法，其特征在于：配制的质量浓度为30-80％的PEG溶液作为母液加入到生物样品中，所选溶液体系可以为下列溶剂中的一种，纯水，细胞培养常用PBS缓冲液，磷酸二氢钠-磷酸氢二钠缓冲溶液碱性溶剂，pH值为6-8。 7.按照权利要求1所述的富集方法，其特征在于：所述的有机溶液为DMSO，丙酮，丁醇，异丙醇，DMF中的一种或两种以上，使其在体系中最终体积浓度范围为5-80％；加入的盐溶液中的盐为氯化钠、氯化钾、氯化钙、磷酸二氢钠等的一种或两种以上，使其在体系中最终浓度范围为10-300mM。 8.按照权利要求1所述的富集方法，其特征在于：步骤3)所得的溶液混合均匀，放置低温环境下静置冻结所放置的温度为-200℃至-10℃。 9.按照权利要求1或8所述的富集方法，其特征在于：步骤3)所得的溶液混合均匀，放置低温环境下静置冻结静置于低温环境下的时间为1min-60min。 10.按照权利要求1所述的富集方法，其特征在于：步骤3)生物样品低温静置后，置于0℃-37℃进行温度平衡融化，至样品呈均匀溶液。 11.按照权利要求1所述的富集方法，其特征在于：步骤4)形成均匀溶液的样本，在500g-5000g条件下进行离心。 12.按照权利要求1或12所述的富集方法，其特征在于：形成均匀溶液的样本，离心时间5min-30min，形成的沉淀为外泌体。 13.按照权利要求1所述的富集方法，其特征在于：所获得的外泌体，可以溶解在PBS中，再进行一次沉淀操作，获得进一步纯化的外泌体。 14.按照权利要求1或13所述的富集方法，其特征在于：所述的富集方法能用于临床生物化学检测、基因组学、代谢组学或蛋白质组学分析或活性研究。
所属类别：	发明专利