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原文传递一种尿液中外泌体的富集方法

专利名称：	一种尿液中外泌体的富集方法
摘要：	本发明公开了一种尿液中外泌体的富集方法，包括向待测尿液样本中加入结合缓冲液及硅铝酸盐材料，得到混悬液；将所述混悬液孵育后，进行高速离心，去除上清液，保留沉淀Ⅰ；采用清洗缓冲液重悬所述沉淀Ⅰ重悬得到重悬液，将所述重悬液高速离心后去除上清，保留沉淀Ⅱ，重复该步骤数次，最后得到包含外泌体的沉淀。本发明采用硅铝酸盐材料及相应结合缓冲液，可有效富集尿液中外泌体；并且采用在线酶解的方式，可直接对所富集的外泌体蛋白质组进行后续的检测分析。本发明方法操作简单，富集速度快，只需要通过孵育‑离心‑洗涤‑离心4个步骤就可完成尿液中外泌体的富集，提高检测灵敏度的同时减少人为操作误差。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	天津;12
申请人：	谱天(天津)生物科技有限公司
发明人：	李嘉欣;宋雷;任丽;马聪聪;原续波;赵瑾;陈亮宇;李捷
专利状态：	有效
申请日期：	2021-12-10T00:00:00+0800
发布日期：	2022-03-18T00:00:00+0800
申请号：	CN202111505906.5
公开号：	CN114199665A
代理机构：	南京中律知识产权代理事务所(普通合伙)
代理人：	祝坤
分类号：	G01N1/40;G01N30/02;G01N30/06;G01N30/14;G01N30/72;G01N15/02;G;G01;G01N;G01N1;G01N30;G01N15;G01N1/40;G01N30/02;G01N30/06;G01N30/14;G01N30/72;G01N15/02
申请人地址：	300308 天津市滨海新区空港经济区西七道26号
主权项：	1.一种尿液中外泌体的富集方法，其特征在于，包括以下步骤： S1、将尿液进行低速离心，保留上清液为待测尿液样本； S2、向待测尿液样本中加入结合缓冲液及硅铝酸盐材料，得到混悬液； S3、将所述混悬液孵育后，进行高速离心，去除上清液，保留沉淀Ⅰ； S4、采用清洗缓冲液重悬所述沉淀Ⅰ得到重悬液，将所述重悬液高速离心后去除上清，保留沉淀Ⅱ，重复该步骤数次，最后得到包含外泌体的沉淀。 2.根据权利要求1所述的尿液中外泌体的富集方法，其特征在于，步骤S1中，所述低速离心的条件如下：离心力为200～10,000g，温度为2～26℃，时间为1～60分钟。 3.根据权利要求1所述的尿液中外泌体的富集方法，其特征在于，步骤S2中，所述结合缓冲液成分包括Tris、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、磷酸钾、磷酸、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、磷酸钠、氯化钾、氯化钠、柠檬酸、柠檬酸钠、巴比妥酸、巴比妥钠、氢氧化钠、盐酸、EDTA、SDS、NP-40、CHAPS、吐温、Triton、PEG、乙腈、甲醇中的一种或任意组合。 4.根据权利要求1所述的尿液中外泌体的富集方法，其特征在于，步骤S2中，所述硅铝酸盐材料选自3A型、4A型、5A型、10Z型、13Z型、Y型或丝光沸石型中的一种或几种的混合物，或者某一类型中几种的混合物。 5.根据权利要求1所述的尿液中外泌体的富集方法，其特征在于，步骤S2中，所述硅铝酸盐材料选自NaY、USY和丝光沸石的混合物，优选三者的质量比为NaY：USY：丝光沸石＝1：1：1。 6.根据权利要求1所述的尿液中外泌体的富集方法，其特征在于，步骤S3中，所述孵育的条件为：18～37℃下孵育1～120分钟；所述高速离心的条件如下：离心力为2,000～22,000g，温度为2～26℃，时间为1～120分钟。 7.根据权利要求1所述的尿液中外泌体的富集方法，其特征在于，步骤S4中，所述清洗缓冲液选自步骤S1所使用的结合缓冲液或相应稀释液；所述高速离心的条件如下：离心力为2,000～22,000g，温度为2～26℃，时间为1～120分钟；该步骤可重复3次。
所属类别：	发明专利