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猪塞尼卡谷病毒ELISA抗体检测方法及应用
| 专利名称： | 猪塞尼卡谷病毒ELISA抗体检测方法及应用 |
| 摘要： | 本发明提供一种猪塞尼卡谷病毒ELISA抗体检测方法及应用，该方法以SVV 3AB重组蛋白作为包被抗原，本发明的3AB ELISA抗体检测方法作为一种检测工具，可用于临床血清检测，为疫病的诊断、SVV抗体检测试剂盒的研发奠定了基础。 |
| 专利类型： | 发明专利 |
| 国家地区组织代码： | 江苏;32 |
| 申请人： | 南京农业大学 |
| 发明人： | 姜平;延君芳;范慧;白娟;李亮 |
| 专利状态： | 有效 |
| 申请日期： | 2019-05-23T00:00:00+0800 |
| 发布日期： | 2019-09-10T00:00:00+0800 |
| 申请号： | CN201910435600.3 |
| 公开号： | CN110221064A |
| 代理机构： | 南京天华专利代理有限责任公司 |
| 代理人： | 徐冬涛;李晓峰 |
| 分类号： | G01N33/569(2006.01);G;G01;G01N;G01N33 |
| 申请人地址： | 211225 江苏省南京市溧水区白马镇国家农业科技园南京农业大学基地 |
| 主权项： | 1.一种猪塞尼卡谷病毒ELISA抗体检测试剂盒，其特征在于，该试剂盒以SVV 3AB重组蛋白作为包被抗原。 2.根据权利要求1所述的猪塞尼卡谷病毒ELISA抗体检测试剂盒，其特征在于，所述SVV3AB重组蛋白的制备方法为：设计特异性引物： SVV-3AB-F：5'GAGGAATTCAGCCCTAACGA 3' SVV-3AB-R：5'GCGCTCGAGTCACTGTTGCATTTC 3'， 将SVV 3AB基因片段克隆至pET30a(+)表达载体获得重组质粒，将重组质粒转化至感受态的表达菌E.coli BL21(DE3)中进行诱导表达，收集上清液进行纯化，得到纯化后的重组蛋白。 3.根据权利要求1所述的猪塞尼卡谷病毒ELISA抗体检测试剂盒，其特征在于，该试剂盒还包括封闭液、包被缓冲液、血清稀释液和酶标二抗。 4.根据权利要求3所述的猪塞尼卡谷病毒ELISA抗体检测试剂盒，其特征在于，所述的封闭液为5％脱脂乳，所述的包被缓冲液为pH 9.6的碳酸盐缓冲液，所述的血清稀释液为PBST，所述的酶标二抗为HRP-SPA。 5.权利要求1-4中任一项所述的试剂盒在检测猪塞尼卡谷病毒中的应用，所述应用不以疾病的诊断和治疗为目的。 6.一种非诊疗目的的猪塞尼卡谷病毒间接ELISA抗体检测方法，其特征在于：该方法步骤如下： (1)包被酶标板：将纯化后的权利要求1或2中所述的SVV 3AB重组蛋白包被微孔板；包被浓度为1.0μg/mL；包被条件为37℃放置2h后，4℃放置12h； (2)封闭酶标板；以5％脱脂乳37℃封闭3h； (3)加入稀释后的待检血清，37℃孵育45min；所述稀释为用血清稀释液将待检血清作100倍稀释； (4)加入以1:10000稀释的酶标二抗HRP-SPA，37℃作用30min； (5)显色，终止，并在酶标仪上读取OD450值。 7.SVV 3AB重组蛋白作为包被抗原在制备猪塞尼卡谷病毒ELISA抗体检测试剂盒中的应用。 8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述SVV 3AB重组蛋白的制备方法为：设计特异性引物： SVV-3AB-F：5'GAGGAATTCAGCCCTAACGA 3' SVV-3AB-R：5'GCGCTCGAGTCACTGTTGCATTTC 3'， 将SVV 3AB基因片段克隆至pET30a(+)表达载体获得重组质粒，将重组质粒转化至感受态的表达菌E.coli BL21(DE3)中进行诱导表达，收集上清液进行纯化，得到纯化后的重组蛋白。 |
| 所属类别： | 发明专利 |
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