详情

原文传递猪圆环病毒2型双抗体夹心ELISA试剂盒及其应用

专利名称：	猪圆环病毒2型双抗体夹心ELISA试剂盒及其应用
摘要：	本发明涉及一种猪圆环病毒2型双抗体夹心ELISA检测试剂盒及检测方法，所述试剂盒包括：包被有抗猪圆环病毒Cap蛋白单克隆抗体的酶标板、封闭液、一抗、酶标二抗、浓缩洗涤液、显色液、终止液、标准品、阳性对照、阴性对照。本发明的猪圆环病毒2型双抗体夹心ELISA检测周期短、操作简便、灵敏度高、特异性强，设备要求简单，能定性、半定性及定量分析，且试剂盒可以实现大批量样本的快速检测。本发明还提供使用上述试剂盒在检测猪圆环病毒2型灭活疫苗抗原中的应用。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	天津;12
申请人：	天津瑞普生物技术股份有限公司
发明人：	李守军;张英;吕茂杰;董瑞凯;郁宏伟;张桂红;厚华艳
专利状态：	有效
申请日期：	2018-09-19T00:00:00+0800
发布日期：	2019-05-24T00:00:00+0800
申请号：	CN201811095919.8
公开号：	CN109799351A
代理机构：	天津合正知识产权代理有限公司
代理人：	陈松
分类号：	G01N33/68(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	300308 天津市滨海新区自贸试验区(空港经济区)东九道1号
主权项：	1.一种猪圆环病毒2型双抗体夹心ELISA试剂盒，其特征在于：包被有抗猪圆环病毒Cap蛋白单克隆抗体的酶标板、封闭液、一抗、酶标二抗、浓缩洗涤液、显色液、终止液、标准品、阳性对照、阴性对照。 2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：包被稀释液为0.05M碳酸盐缓冲液(PH9.6，Na2CO3 1.59g，NaHCO3 2.93g)。 3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述封闭液为含1％-10％BSA或1％-10％脱脂乳的PBS溶液。 4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于：所述所述封闭液为含5％脱脂乳的PBS溶液。 5.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述一抗为抗猪圆环病毒2型多克隆抗体。 6.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述酶标二抗为辣根过氧化物酶标记的山羊抗猪酶标二抗。 7.权利要求1所述的试剂盒在检测猪圆环病毒2型灭活疫苗抗原中的应用。 8.一种猪圆环病毒2型双抗体夹心ELISA检测方法，其特征在于，包括以下步骤： (1)用包被稀释纯化后的单抗，100ul/孔包被酶标板，4℃作用过夜； (2)甩去板中的液体，用洗涤液洗板5次，每次5min，最后一次拍干，加入封闭液，200ul/孔，置37℃孵育； (3)洗板5次，加入一定稀释度的待检抗原样品及对照样品，100ul/孔，置37℃孵育，同时设不加抗原对照(用脱脂乳代替)； (4)洗板5次，加入一抗，即纯化的抗猪圆环病毒多克隆抗体，100ul/孔，置37℃孵育； (5)洗板5次，加入酶标二抗，100ul/孔，置37℃孵育； (6)洗板5次，加入底物显色液，100ul/孔，37℃避光显色； (7)加终止液，50ul/孔，混匀后10min内测定OD450nm值； (8)结果判定：P/N＝(待检样品孔OD值‐空白孔OD值)/(阴性对照孔OD值‐空白孔OD值)，当阳性对照孔的OD值(P)≥1.0、阴性对照孔的OD值(N)<0.2时，试验成立，待检样品孔P/N≥2时为阳性。 9.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于：单抗1:400稀释、猪多抗血清1:6400稀释。 10.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于：封闭时间为1h。
所属类别：	发明专利