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原文传递一种快速检测HE4和CA125的纳米硒试剂盒

专利名称：	一种快速检测HE4和CA125的纳米硒试剂盒
摘要：	本发明属于生物学免疫层析检测方法领域，具体涉及一种快速检测HE4和CA125的纳米硒试剂盒及其制备方法。该试剂盒由样品垫、结合垫、反应垫、吸水垫和PVC底板组成；所述的反应垫上有包被有抗CA125抗体A2的检测线T1、包被有抗HE4抗体B2的检测线T2以及包被有羊抗鼠IgG的质控线C；通过观察检测线的显色反应即可实现早期卵巢癌的床旁快速筛查诊断。本发明制备的纳米硒免疫层析试剂盒具有特异性强、灵敏度高、准确性好、简便快速、所需检测样本量少、适用于卵巢癌高危人群筛查及家庭自检和床旁快速检测。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	河南;41
申请人：	河南大学
发明人：	王志增;王耀辉;郭亚飞;任阳光;周倩文;郑植;张海龙;马远方;李淑莲
专利状态：	有效
申请日期：	2019-07-25T00:00:00+0800
发布日期：	2019-09-10T00:00:00+0800
申请号：	CN201910675929.7
公开号：	CN110221084A
代理机构：	北京力量专利代理事务所(特殊普通合伙)
代理人：	韩慧颖
分类号：	G01N33/68(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	475004 河南省开封市金明区河南大学新校区
主权项：	1.一种快速检测HE4和CA125的纳米硒试剂盒，所述的试剂盒由样品垫(1)、结合垫(3)、反应垫(2)、吸水垫(4)和PVC底板(5)组成，所述样品垫(1)、结合垫(3)、反应垫(2)和吸水垫(4)依次搭接在PVC底板(5)上，其特征在于：所述的反应垫(2)上设置有包被有抗CA125抗体的检测线T1、包被有抗HE4抗体的检测线T2、包被有羊抗鼠IgG的质控线C。 2.如权利要求1所述的一种快速检测HE4和CA125的纳米硒试剂盒，其特征在于所述的样品垫(1)经样品垫处理液处理，样品垫处理液由磷酸盐缓冲液、蔗糖、中性盐、牛血清白蛋白和吐温组成。 3.如权利要求2所述的一种快速检测HE4和CA125的纳米硒试剂盒，其特征在于所述的中性盐选自氯化钠、氯化钾、氯化钙、氯化钡、硫酸钙、硝酸钾中的一种。 4.如权利要求3所述的一种快速检测HE4和CA125的纳米硒试剂盒，其特征在于，所述样品垫处理液所含中性盐为氯化钠或氯化钾，浓度为300mM。 5.如权利要求4所述的纳米硒试剂盒，其特征在于，所述的样品垫处理液中的中性盐为氯化钠，浓度为300mM。 6.如权利要求1所述的一种快速检测HE4和CA125的纳米硒试剂盒，其特征在于所述的纳米硒与抗HE4抗体和抗CA125抗体偶联的复合物经工作液悬浮固化于结合垫(3)上，所述工作液由磷酸盐缓冲液、中性盐、牛血清白蛋白、糖类和吐温组成，所述中性盐选自氯化钠、氯化钾、氯化钙、氯化钡、硫酸钙、硝酸钾中的一种；所述糖类选自单醣、双醣或多糖中的一种。 7.如权利要求6所述的纳米硒试剂盒，其特征在于，所述工作液中的糖类为蔗糖和海藻糖，所述的处理液和工作液的磷酸盐缓冲液的浓度为0.01mol/L，pH为7.2。 8.如权利要求6所述的一种快速检测HE4和CA125的纳米硒试剂盒，其特征在于，所述中性盐浓度为150-500mM。 9.一种快速检测HE4和CA125的纳米硒试剂盒的制备方法，包括以下步骤： (1)纳米硒的制备取超纯水，加入PEG，搅拌，得PEG溶液；将SDS溶于PEG溶液中，搅拌，得模板溶液；将亚硒酸溶于模板溶液中，搅拌，得亚硒酸溶液；将维生素C溶于亚硒酸模板溶液中，搅拌，即得纳米硒； (2)抗体标记取1mL步骤(1)制备得到的纳米硒，加入10μL浓度为1mol/L的碳酸钾溶液，调节体系的pH值为7.5；再加入2μL的2mg/mL的Anti-HE4-Ab1，室温混合30min，使Anti-HE4-Ab1充分的结合到纳米硒粒子上，完成Anti-HE4-Ab1的标记；取1mL步骤(1)制备得到的纳米硒，加入12μL浓度为1mol/L的碳酸钾溶液，调节体系的pH值为8.0；再加入3μL的2mg/mL的Anti-CA125-Ab1，室温混合30min，使Anti-CA125-Ab1充分的结合到纳米硒粒子上，完成Anti-CA125-Ab1的标记； (3)封闭向步骤(2)中纳米硒标记的Anti-CA125-Ab1和纳米硒标记的Anti-HE4-Ab1中加入牛血清白蛋白溶液，控制牛血清白蛋白的质量终浓度为1％，室温混匀30min； (4)重悬封闭后的纳米硒标记抗体在10000rpm下离心10min，弃去上清，沉淀用120μL的工作液重悬；所述工作液由磷酸盐缓冲液、氯化钠、牛血清白蛋白、蔗糖、海藻糖和Tween-20组成，其中磷酸盐缓冲液浓度为0.01mol/L，pH为7.2；氯化钠浓度为150mM，牛血清白蛋白质量终浓度为2％，蔗糖质量终浓度为3％，海藻糖质量终浓度为3％，Tween-20体积终浓度为0.1％；磷酸盐缓冲液中，Na2HPO4·12H2O质量含量为0.26％，NaH2PO4·2H2O质量含量为0.044％； (5)样品垫的制备把GF-08玻璃纤维膜裁剪成220mm×100mm，浸泡在样品垫处理液中5min，然后在40℃的鼓风干燥箱中干燥12h，取出即得样品垫，放入自封袋中备用；样品垫处理液由磷酸盐缓冲液、氯化钠、牛血清白蛋白、蔗糖和Tween-20组成，其中，磷酸盐缓冲液的浓度为0.01mol/L，pH为7.2，氯化钠浓度为300mM，牛血清白蛋白的体积终浓度为10％，Tween-20的体积终浓度为0.05％，蔗糖的质量浓度为7％，磷酸盐缓冲液中Na2HPO4·12H2O的质量含量为0.26％，NaH2PO4·2H2O的质量含量为0.044％； (6)结合垫的制备将步骤(2)纳米硒标记的Anti-HE4-Ab1和Anti-CA125-Ab1分别均匀的铺在GF-06玻璃纤维膜上，干燥，使标记抗体的纳米硒粒子固化在玻璃纤维膜上即得结合垫，取出放入自封袋，加入干燥剂，密封保存； (7)反应垫的制备将硝酸纤维素膜贴在PVC板上，然后用0.01mol/L，pH7.2的PBS把Anti-CA125-Ab2稀释至浓度为2mg/mL，作为T1检测线包被原；把Anti-HE4-Ab2稀释至浓度为1mg/mL，作为T2检测线包被原；把羊抗鼠IgG稀释为2mg/mL，作为质控线C包被原；用喷金划膜仪以1μL/cm划膜，置于40℃鼓风干燥3h即得反应垫，取出放入自封袋，备用； (8)试剂盒组装将结合垫贴在反应垫的前端，再将样品垫贴在结合垫的前端，最后将吸水纸的前端贴在反应垫的后端，另一端贴在PVC板的末端，即完成试纸条的组装，可得HE4联合CA125快速检测试剂盒。 10.一种样品垫处理液，其特征在于，所述样品垫处理液由磷酸盐缓冲液、蔗糖、300mM氯化钠、牛血清白蛋白和吐温组成。
所属类别：	发明专利