详情

原文传递净化黄曲霉毒素、环匹阿尼酸、赭曲霉毒素A和玉米赤霉烯酮免疫吸附剂及免疫亲和柱

专利名称：	净化黄曲霉毒素、环匹阿尼酸、赭曲霉毒素A和玉米赤霉烯酮免疫吸附剂及免疫亲和柱
摘要：	本发明提供了净化黄曲霉毒素、环匹阿尼酸、赭曲霉毒素A和玉米赤霉烯酮免疫吸附剂及免疫亲和柱及应用。黄曲霉毒素、环匹阿尼酸、赭曲霉毒素A和玉米赤霉烯酮免疫吸附剂包括固相载体和与该固相载体偶联的抗黄曲霉毒素单克隆抗体、抗环匹阿尼酸单克隆抗体、抗赭曲霉毒素A单克隆抗体和抗玉米赤霉烯酮单克隆抗体，所述的环匹阿尼酸单克隆抗体由保藏编号为CCTCC NO.C201871的杂交瘤细胞株YTT‑2分泌产生的单克隆抗体。本发明提供的免疫亲和柱可用于同时含有黄曲霉毒素、环匹阿尼酸、赭曲霉毒素A和玉米赤霉烯酮样品的净化‑检测前处理，四种之间无相互干涉影响，性能稳定，进而通过使用本亲和柱建立了一种经济，快捷，精确，安全的高效液相色谱‑质谱联用仪检测方法。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	湖北;42
申请人：	中国农业科学院油料作物研究所
发明人：	李培武;张奇;白艺珍;李慧;张文
专利状态：	有效
申请日期：	2019-04-30T00:00:00+0800
发布日期：	2019-08-16T00:00:00+0800
申请号：	CN201910360692.3
公开号：	CN110133249A
代理机构：	湖北武汉永嘉专利代理有限公司
代理人：	乔宇
分类号：	G01N33/543(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	430062 湖北省武汉市武昌区徐东二路2号
主权项：	1.黄曲霉毒素、环匹阿尼酸、赭曲霉毒素A和玉米赤霉烯酮免疫吸附剂，其特征在于：所述的免疫吸附剂包括固相载体和与该固相载体上偶联的抗黄曲霉毒素单克隆抗体、抗环匹阿尼酸单克隆抗体、抗赭曲霉毒素A单克隆抗体和抗玉米赤霉烯酮单克隆抗体，所述的抗环匹阿尼酸单克隆抗体由保藏编号为CCTCC NO.C201871的杂交瘤细胞株YTT-2分泌产生。 2.根据权利要求1所述的黄曲霉毒素、环匹阿尼酸、赭曲霉毒素A和玉米赤霉烯酮免疫吸附剂，其特征在于：所述的抗黄曲霉毒素单克隆抗体为抗黄曲霉毒素通用单克隆抗体，由保藏编号为CCTCC NO.C201013的杂交瘤细胞株1C11分泌产生；所述的抗赭曲霉毒素A单克隆抗体由保藏编号为CCTCC NO.C201329的杂交瘤细胞株1H2分泌产生；所述的抗玉米赤霉烯酮单克隆抗体由保藏编号为CCTCC NO.C201328的杂交瘤细胞株2D3分泌产生。 3.装载有权利要求1所述的黄曲霉毒素、环匹阿尼酸、赭曲霉毒素A和玉米赤霉烯酮免疫吸附剂的净化黄曲霉毒素、环匹阿尼酸、赭曲霉毒素A和玉米赤霉烯酮复合亲和柱。 4.权利要求3所述的净化黄曲霉毒素、环匹阿尼酸、赭曲霉毒素A和玉米赤霉烯酮复合亲和柱的制备，其特征在于：包括以下步骤： a)固相载体基质处理将CNBr活化的琼脂糖凝胶基质粉末在pH2-3的条件下用HCl洗涤除杂； b)配体偶联使用偶联缓冲液溶解待偶联的抗黄曲霉毒素单克隆抗体、抗环匹阿尼酸单克隆抗体、抗赭曲霉毒素A单克隆抗体和抗玉米赤霉烯酮单克隆抗体，获得各抗体溶液，迅速将步骤a)活化的琼脂糖凝胶基质转移到所述抗体溶液中，进行偶联； c)配体封闭封闭所有残留的活性基团； d)除去偶联后未偶联上的多余的配体； e)装柱。 5.根据权利要求4所述的净化黄曲霉毒素、环匹阿尼酸、赭曲霉毒素A和玉米赤霉烯酮复合亲和柱的制备，其特征在于：所述步骤a)中洗涤用HCl浓度为1mmol/L，洗涤时间为15min；步骤b)中的偶联缓冲液为0.2mol/L NaHCO3，pH8.3。 6.权利要求4所述的净化黄曲霉毒素、环匹阿尼酸、赭曲霉毒素A和玉米赤霉烯酮复合亲和柱的制备，其特征在于：步骤b)中每个抗体溶液浓度为10-15mg/mL；偶联条件为：室温条件20-25℃下充分混匀上述混和物2-4h。 7.权利要求4所述的净化黄曲霉毒素、环匹阿尼酸、赭曲霉毒素A和玉米赤霉烯酮复合亲和柱的制备，其特征在于：步骤c)的配体封闭过程为：转移经步骤b)处理的琼脂糖凝胶基质至0.1mol/LTris-HCl缓冲液中，室温条件下静置2-4h。 8.权利要求4所述的净化黄曲霉毒素、环匹阿尼酸、赭曲霉毒素A和玉米赤霉烯酮复合亲和柱的制备，其特征在于：步骤d)为：依次用pH值为4和pH值为8的缓冲液对经步骤c)处理后的琼脂糖凝胶基质进行洗涤，至少洗涤3个循环；pH值为4和pH值为8的缓冲液分别可选0.1mol/L醋酸/醋酸钠缓冲液和0.1mol/L Tris-HCl缓冲液。 9.权利要求4所述的净化黄曲霉毒素、环匹阿尼酸、赭曲霉毒素A和玉米赤霉烯酮复合亲和柱的制备，其特征在于：步骤d)处理后，用5倍琼脂糖凝胶体积的0.01％NaN3-PBS洗涤，并使用0.01％NaN3-PBS保存，然后装柱。 10.基于权利要求3所述的净化黄曲霉毒素、环匹阿尼酸、赭曲霉毒素A和玉米赤霉烯酮复合亲和柱检测黄曲霉毒素、环匹阿尼酸、赭曲霉毒素A和玉米赤霉烯酮含量的方法，其特征在于：将含有黄曲霉毒素、环匹阿尼酸、赭曲霉毒素A和玉米赤霉烯酮的样品通过免疫亲和柱时，免疫吸附剂会特异性的吸附黄曲霉毒素、环匹阿尼酸、赭曲霉毒素A和玉米赤霉烯酮，其他的杂质则流出免疫亲和柱，然后用色谱级甲醇洗脱亲和柱，收集洗脱液即净化浓缩后的样品供高效液相色谱-质谱联用仪检测，分析样品中各毒素含量。
所属类别：	发明专利