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原文传递一种应用丛枝菌根真菌的杉木磷高效利用良种鉴定方法

专利名称：	一种应用丛枝菌根真菌的杉木磷高效利用良种鉴定方法
摘要：	本发明公开了一种应用丛枝菌根真菌的杉木磷高效利用良种鉴定方法，属于杉木无性繁殖技术领域。发明的方法通过观测室内模拟低磷胁迫条件下，筛选出根系皮层组织细胞溶解明显，且有丛枝菌根真菌繁殖体侵染定殖的杉木无性系，即为磷高效利用良种。本发明能快速、精准筛选出高效利用土壤磷的杉木优良无性系，尤其适合于杉木高密度种植林分的运用。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	福建;35
申请人：	福建农林大学
发明人：	吴鹏飞;许静静;吴文景;邹显花;马祥庆
专利状态：	有效
申请日期：	2019-05-31T00:00:00+0800
发布日期：	2019-08-30T00:00:00+0800
申请号：	CN201910470356.4
公开号：	CN110186920A
代理机构：	福州元创专利商标代理有限公司
代理人：	饶文君;蔡学俊
分类号：	G01N21/84(2006.01);G;G01;G01N;G01N21
申请人地址：	350002 福建省福州市仓山区上下店路15号
主权项：	1.一种应用丛枝菌根真菌的杉木磷高效利用良种鉴定方法，其特征在于：通过模拟低磷胁迫条件，筛选出根系皮层组织细胞溶解明显，且有丛枝菌根真菌繁殖体侵染定殖的杉木无性系，即为磷高效利用良种。 2.根据权利要求1所述的一种应用丛枝菌根真菌的杉木磷高效利用良种鉴定方法，其特征在于，具体包括以下步骤：（1）材料准备：准备盆栽装置、参试无性系杉木幼苗和栽培基质；（2）丛枝菌根真菌接种：将丛枝菌根真菌的菌种与步骤（1）准备的栽培基质混合均匀、备用；（3）栽植与管理：将步骤（1）中参试杉木幼苗栽植于步骤（1）的盆栽装置中，1株/盆；同时用步骤（2）接种丛枝菌根真菌之后的栽培基质装入盆栽装置，≥5 kg/盆；为保证杉木幼苗的正常生长，每隔7 d每盆根据供磷浓度分别浇一次对应的1/4 Hoagland’s营养液，根据栽培基质重量，每次浇60 ml/kg，以满足杉木生长对其他营养元素的需求；（4）收获：参试杉木幼苗栽植2~3个月后进行参试苗木的收获，将收获的杉木幼苗根系用去离子水冲洗干净，利用棉布吸干根系表面水分；将根系样品分为2份备用，分别用于观察丛枝菌根真菌侵染情况和观测皮层组织细胞的溶解程度；（5）侵染情况观察：将根系样品制片，通过显微镜观察丛枝菌根真菌的侵染情况；（6）根系皮层组织细胞溶解情况观察：将根系样品制备成切片，显微镜观察皮层组织细胞溶解程度；将根系样品放入5 ml玻璃瓶中，加入2ml体积比为甲醛：乙酸：70vol%乙醇=1:1:18的固定液，经过脱水、浸蜡、包埋、切片、脱蜡、染色以及显微镜观察，进行观测计算皮层组织细胞溶解的面积；（7）根据参试杉木不同无性系幼苗根系丛枝菌根真菌根系侵染率和皮层组织细胞溶解率的差异，筛选出侵染率15%以上、皮层组织细胞溶解率10%以上的杉木无性系为磷高效利用良种。 3.根据权利要求2所述的一种应用丛枝菌根真菌的杉木磷高效利用良种鉴定方法，其特征在于：所述步骤（1）所述盆栽装置为聚乙烯材质盆栽装置，使用前在0.1g/L KMnO4溶液中浸泡20 min进行消毒，然后取出用无菌水冲洗、晾干，备用；所述参试无性系杉木幼苗为长势均一、无病虫害的不同无性系杉木幼苗，采用0.5 wt% NaClO溶液对参试杉木根系表面消毒0.5 min，再用无菌水反复冲洗处理后备用；所述栽培基质为洗净晾干后过2 mm 网筛的河心沙与珍珠岩按体积比为3:1的比例混合，装入灭菌袋中，灭菌后自然晾干7 d后备用；灭菌的条件为121℃，0.1~0.2 MPa 高温高压灭菌30 min。 4.根据权利要求3所述的一种应用丛枝菌根真菌的杉木磷高效利用良种鉴定方法，其特征在于：所述栽培基质有效磷含量低至0.12±0.02 mg/kg。 5.根据权利要求2所述的一种应用丛枝菌根真菌的杉木磷高效利用良种鉴定方法，其特征在于：所述步骤（2）所述丛枝菌根真菌的菌种与步骤（1）准备的栽培基质按体积比为1:10的比例混合。 6.根据权利要求2所述的一种应用丛枝菌根真菌的杉木磷高效利用良种鉴定方法，其特征在于：步骤（2）所述丛枝菌根真菌的菌种为根内球囊霉（Rhizophagus irregularis）。 7.根据权利要求2所述的一种应用丛枝菌根真菌的杉木磷高效利用良种鉴定方法，其特征在于：步骤（5）所述根系样品制片具体为：根系样品剪成0.5-1 cm的根段，放入50 ml烧杯中，用99 wt％乙醇和60 wt％乙酸按 3：1体积比混合的储存溶液固定4 h以上；除去储存液，无菌水洗涤2次；加入20 wt% KOH溶液90~96℃加热透明45 min；除去KOH，无菌水洗涤2次；加入2 wt% HCl溶液酸化30 min；除去HCl溶液，无菌水洗涤2次；加入0.05 wt% Trypanblue溶液染色10~30 min，洗去染色剂，加入脱色液脱色。 8.根据权利要求7所述的一种应用丛枝菌根真菌的杉木磷高效利用良种鉴定方法，其特征在于1级根90℃加热透明，2级根96℃加热透明；0.05 wt% Trypan blue溶液染色时1级根染色30 min，2级根染色10 min。 9.权利要求1-8任一项所述方法在磷高效利用杉木良种选育中的应用。
所属类别：	发明专利