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原文传递一种检测促甲状腺激素的分析方法

专利名称：	一种检测促甲状腺激素的分析方法
摘要：	本发明公开了一种检测促甲状腺激素的分析方法，将表面活性剂处理过的抗促甲状腺激素特异性IgY抗体作为捕获抗体并与磁颗粒偶联，将吖啶酯与抗促甲状腺激素配对的IgG抗体偶联作为示踪物，通过设计建立双抗体夹心法检测促甲状腺激素。本发明可以有效排除内源性干扰因素的影响，并且IgY抗体经过特定表面活性剂的处理后，偶联效率和发光值均大大提高，从而使检测结果更加准确。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	山西;14
申请人：	太原瑞盛生物科技有限公司
发明人：	徐兵;曹晶;杜爱铭
专利状态：	有效
申请日期：	2019-05-14T00:00:00+0800
发布日期：	2019-08-30T00:00:00+0800
申请号：	CN201910398648.1
公开号：	CN110187132A
代理机构：	北京慕达星云知识产权代理事务所(特殊普通合伙)
代理人：	崔自京
分类号：	G01N33/76(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	030000 山西省太原市太原不锈钢产业园区钢园北路10号(办公楼二层)
主权项：	1.一种检测促甲状腺激素的分析方法，其特征在于，具体包括以下步骤： (1)将经促甲状腺激素抗原免疫处理得到的鸡蛋进行除脂和纯化，得到抗促甲状腺激素IgY抗体，-20℃保存； (2)将步骤(1)中得到的抗促甲状腺激素IgY抗体与表面活性剂混合反应，然后加入缓冲液超滤清洗，再将抗促甲状腺激素IgY抗体吸出，得到经表面活性剂处理过的抗促甲状腺激素IgY抗体； (3)向经预处理后的磁微粒中加入偶联试剂进行第一次室温孵育，然后加入步骤(2)中得到的经表面活性剂处理过的抗促甲状腺激素IgY抗体进行第二次室温孵育，弃去上清液、洗涤，得到磁微粒混悬液，2-8℃保存备用； (4)向标记缓冲液中加入抗促甲状腺激素IgG抗体混匀，再加入吖啶酯震荡混匀反应，加入赖氨酸至标记反应终止,超滤，得到吖啶酯标记物，2-8℃保存备用； (5)制备促甲状腺激素校准品，然后分别将校准品、步骤(3)中得到的磁微粒混悬液依次加入反应管中，振荡混匀，第一次孵育，分离，清洗，然后加入步骤(4)中得到的吖啶酯标记物，第二次孵育，分离，清洗，放入发光仪中进行检测其发光强度，建立发光强度和校准品浓度的标准曲线； (6)将待测样本按照步骤(5)中的方法检测其发光强度，根据标准曲线即可计算出待测样本中促甲状腺激素的含量。 2.根据权利要求1所述的一种检测促甲状腺激素的分析方法，其特征在于，步骤(2)中，所述表面活性剂为N-十二烷基-N,N-二甲基氨基丙磺酸盐或十烷基二甲基氧化铵。 3.根据权利要求1所述的一种检测促甲状腺激素的分析方法，其特征在于，步骤(2)中，所述抗促甲状腺激素IgY抗体与表面活性剂的质量比为0.02-1.5：1。 4.根据权利要求1所述的一种检测促甲状腺激素的分析方法，其特征在于，步骤(2)中，所述混合反应时间为0.5-1h。 5.根据权利要求1所述的一种检测促甲状腺激素的分析方法，其特征在于，步骤(3)中，所述磁微粒与偶联试剂的质量比为1-10:1；所述偶联试剂与抗促甲状腺激素IgY抗体的质量比为10-30:1。 6.根据权利要求1所述的一种检测促甲状腺激素的分析方法，其特征在于，步骤(3)中，所述第一次室温孵育时间为15-60min，所述第二次温室孵育时间为1-4h。 7.根据权利要求1所述的一种检测促甲状腺激素的分析方法，其特征在于，步骤(4)中，每1mg的抗促甲状腺激素IgG抗体加入500-2000μl标记缓冲液；所述吖啶酯与抗促甲状腺激素IgG抗体的摩尔比为5-40:1；每1mg的抗促甲状腺激素IgG抗体加入10-200μL浓度为10％的赖氨酸溶液。 8.根据权利要求1所述的一种检测促甲状腺激素的分析方法，其特征在于，步骤(4)中，所述混匀反应为室温下反应0.5-3h。 9.根据权利要求1所述的一种检测促甲状腺激素的分析方法，其特征在于，步骤(5)中，所述校准品的用量为10-200μL，所述磁微粒混悬液的用量为10-100μL，所述吖啶酯标记物的用量为10-200μL。 10.根据权利要求1所述的一种检测促甲状腺激素的分析方法，其特征在于，步骤(5)中，所述第一次孵育温度为37℃，时间为5-10min；所述第二次孵育温度为37℃，时间为10-20min。
所属类别：	发明专利