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原文传递视黄醇结合蛋白胶乳试剂R2及其制备方法和试剂盒

专利名称：	视黄醇结合蛋白胶乳试剂R2及其制备方法和试剂盒
摘要：	本发明公开了一种视黄醇结合蛋白胶乳试剂R2，为pH为7.0～8.0的缓冲体系，包含有：视黄醇结合蛋白单克隆抗体包被的羧基化聚苯乙烯胶乳溶液：400～600mL/L和恢复液，恢复液包含稳定剂、表面活性剂和电解质，稳定剂为5～10g/L，表面活性剂为2～5g/L，电解质为5～15g/L；恢复液中各组分的含量是指占整个缓冲体系的含量。胶乳溶液由羧基化聚苯乙烯胶乳微球经EDC活化后偶联视黄醇结合蛋白单克隆抗体，并由PAMAM维持偶联效率，最后经封闭剂封闭反应得到。还提供上述视黄醇结合蛋白胶乳试剂R2的具体制备方法及视黄醇结合蛋白胶乳试剂盒。本发明的视黄醇结合蛋白胶乳试剂R2，偶联效率高且分散性好，检测灵敏度高、准确性好。本发明的制备方法，生产效率提高且成本降低。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	上海;31
申请人：	上海执诚生物科技有限公司
发明人：	王青泉;申文君;李宝玉;周健强
专利状态：	有效
申请日期：	2019-06-26T00:00:00+0800
发布日期：	2019-09-10T00:00:00+0800
申请号：	CN201910558841.7
公开号：	CN110221081A
代理机构：	上海韧辰专利代理有限公司
代理人：	刘秋兰
分类号：	G01N33/68(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	201318 上海市浦东新区康新公路3399号6号楼
主权项：	1.一种视黄醇结合蛋白胶乳试剂R2，其特征在于，所述视黄醇结合蛋白胶乳试剂R2为pH为7.0～8.0的缓冲体系，所述缓冲体系包含有：视黄醇结合蛋白单克隆抗体包被的羧基化聚苯乙烯胶乳溶液和恢复液，所述胶乳溶液在整个磷酸盐缓冲体系中的含量为400～600mL/L，其中：所述恢复液包含稳定剂、表面活性剂和电解质，所述稳定剂的含量为5～10g/L，表面活性剂的含量为2～5g/L，电解质的含量为5～15g/L；所述恢复液中各组分的含量是指占整个缓冲体系的含量；所述胶乳溶液为pH为5.0～6.0的缓冲溶液，包括：粒径为50～200nm的羧基化聚苯乙烯胶乳微球、活化用的EDC、偶联加速用的PAMAM和封闭剂；所述羧基化聚苯乙烯胶乳微球的含量为10～15g/L，所述EDC的含量为0.5～1g/L，所述PAMAM的含量为1～4g/L，所述封闭剂的含量为2.5～5g/L；所述胶乳溶液中各组分的含量是指占整个胶乳溶液的含量；所述胶乳溶液由羧基化聚苯乙烯胶乳微球经EDC活化后偶联视黄醇结合蛋白单克隆抗体，并由PAMAM维持偶联效率，最后经封闭剂封闭反应得到。 2.根据权利要求1所述的视黄醇结合蛋白胶乳试剂R2，其特征在于，所述恢复液，还包括防腐剂，所述防腐剂在所述缓冲体系中的浓度为0.5～5g/L。 3.根据权利要求1所述的视黄醇结合蛋白胶乳试剂R2，其特征在于，所述恢复液还包括表面活性剂PAMAM，以提高胶乳的分散稳定性，作为表面活性剂的PAMAM在所述缓冲体系中的浓度为0.5～5g/L。 4.根据权利要求1所述的视黄醇结合蛋白胶乳试剂R2，其特征在于，所述视黄醇结合蛋白单克隆抗体在所述缓冲体系中的浓度为0.2～0.5g/L。 5.根据权利要求1所述的视黄醇结合蛋白胶乳试剂R2，其特征在于，所述封闭剂选自BSA溶液、CE210和CE510中的一种或几种；所述表面活性剂选自聚氧乙烯月桂醚和PAMAM溶液中的一种或两种；所述稳定剂选自BSA溶液、氯化胆碱、d-甘露糖醇中的一种或几种；所述电解质选自氯化钠、氯化钾、硫酸钠中的一种或几种；所述防腐剂选自叠氮钠、proclin300中的一种或两种；所述缓冲体系为磷酸盐缓冲体系、Tris缓冲体系中的一种或两种。 6.一种制备权利要求1～5中任一项所述的视黄醇结合蛋白胶乳试剂R2的方法，其特征在于，包括如下制备步骤： (1)、将配方量的羧基化聚苯乙烯胶乳微球缓慢滴加分散在缓冲溶液中，加入配方量的EDC溶液，搅拌活化，同时滴加配方量的PAMAM溶液，得到初始液； (2)、往步骤(1)制备的初始液中加入视黄醇结合蛋白单克隆抗体进行偶联反应，反应结束后加入配方量的封闭剂进行封闭反应，并超声分散，得到视黄醇结合蛋白单克隆抗体包被的羧基化聚苯乙烯胶乳溶液； (3)、将适量的恢复液加入到步骤(2)的胶乳溶液中，并调节pH至7.0～8.0，即得视黄醇结合蛋白胶乳试剂R2。 7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述羧基化聚苯乙烯胶乳微球的粒径为50～200nm。 8.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述EDC溶液中的EDC的浓度为10～20g/L。 9.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)中，所述活化的时间为10～20分钟；所述步骤(2)中，所述偶联反应的时间为1～2小时，所述封闭反应的时间为0.5～1.5小时。 10.一种视黄醇结合蛋白试剂盒，其特征在于，所述视黄醇结合蛋白试剂盒包括试剂R1，及权利要求1～5任一项所述的视黄醇结合蛋白胶乳试剂R2。
所属类别：	发明专利