详情

原文传递一种辣根过氧化物酶标记抗体的稀释稳定剂的制备方法及其应用

专利名称：	一种辣根过氧化物酶标记抗体的稀释稳定剂的制备方法及其应用
摘要：	本发明公开了一种辣根过氧化物酶标记抗体的稀释稳定剂的制备方法，采用先制备PBST缓冲液，再将胰蛋白酶消化酪蛋白、PEG‑6000、青‑链霉素加入其中混匀过滤除菌制得。这种稀释稳定剂能够有效地延缓酶标抗体的生物活性降低，用于禽流感病毒H7亚型竞争ELISA抗体检测试剂盒中酶标抗体的稀释稳定，经稀释的酶标抗体可在2～8℃保存至少15个月而活性基本不发生改变，当禽流感病毒H7亚型阳性参考血清稀释至64倍时，仍能被检测出阳性，敏感性很强；此外，这种稀释稳定剂对一些常见的酶标抗体的生物活性也具有比较好的效果。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	湖北;42
申请人：	武汉科前生物股份有限公司
发明人：	徐高原;王园园;范俊青;但汉并;徐蓉;明凡;张丽华
专利状态：	有效
申请日期：	2019-05-27T00:00:00+0800
发布日期：	2019-08-30T00:00:00+0800
申请号：	CN201910444278.0
公开号：	CN110187098A
代理机构：	南京纵横知识产权代理有限公司
代理人：	徐瑛;祝蓉蓉
分类号：	G01N33/535(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	430000 湖北省武汉市东湖新技术开发区高新2路419号
主权项：	1.一种辣根过氧化物酶标记抗体的稀释稳定剂的制备方法，其特征在于，其制备方法包括以下步骤： S1、在800ml的去离子水中加入8g NaCl、1.42g Na2HPO4、0.2g KCl、0.27g KH2PO4，充分溶解后，加入0.5mL Tween20，继续加去离子水定容至1000ml，再在121℃下灭菌20min，即得PBST缓冲液； S2、每1000ml的PBST缓冲溶液中加入5～10g胰蛋白酶消化酪蛋白、1～5g PEG-6000、5～10mL青-链霉素充分溶解，用0.22μm的滤膜过滤除菌，得到稀释稳定剂。 2.根据权利要求1所述的辣根过氧化物酶标记抗体的稀释稳定剂的制备方法，其特征在于，步骤S2为：每1000ml的PBST缓冲溶液中加入7g胰蛋白酶消化酪蛋白、2.8g PEG-6000、8mL青-链霉素充分溶解，用0.22μm的滤膜过滤除菌，得到稀释稳定剂。 3.一种辣根过氧化物酶标记抗体的稀释稳定剂的应用，其特征在于，所述稀释稳定剂用于禽流感病毒H7亚型竞争ELISA抗体检测试剂盒中，试剂盒包括酶标抗体、阳性对照、阴性对照、样品稀释液、20倍浓缩洗涤液、底物显色液和终止液，所述酶标抗体采用所述稀释稳定剂按1:1000的比例进行了稀释。 4.根据权利要求3所述的辣根过氧化物酶标记抗体的稀释稳定剂的应用，其特征在于，所述禽流感病毒H7亚型竞争ELISA抗体检测试剂盒的具体使用方法为： P1、取动物全血，血液凝固后4000r/min离心10min，取上清液； P2、将20倍浓缩的洗涤液恢复至20～25℃，并摇动使沉淀溶解，然后用蒸馏水或去离子水20倍稀释，即得洗涤液； P3、将步骤P1所得上清液在血清稀释板中用所述样品稀释液10倍稀释混匀，得混合液； P4、用洗涤液洗涤抗原包被板1次，将混合液、阴性对照和阳性对照各取50μl加至抗原包被板中，混合液设1个反应孔，阴性对照、阳性对照各设2个反应孔，每个孔同时加入酶标抗体50μl；轻轻振匀孔中样品，在37℃下温育45min； P5、弃去孔中液体，每孔加入洗涤液200μl，重复洗涤5次，最后1次洗涤后拍干； P6、每个反应孔加入显色液100μl，在20～25℃下避光显色15min； P7、每个反应孔加终止液50μl，10min内测定结果。 5.根据权利要求4所述的辣根过氧化物酶标记抗体的稀释稳定剂的应用，其特征在于，步骤P2为：将20倍浓缩的洗涤液恢复至20～25℃，然后在37℃水浴锅中加热5～10min并摇动使沉淀溶解，用蒸馏水或去离子水稀释20倍，即得洗涤液。 6.根据权利要求4所述的辣根过氧化物酶标记抗体的稀释稳定剂的应用，其特征在于，步骤P7中，每次测定前在振荡器上震动3～5s。
所属类别：	发明专利