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原文传递一种荧光染料标记的抗体及其制备方法与应用

专利名称：	一种荧光染料标记的抗体及其制备方法与应用
摘要：	本发明提供了一种荧光染料标记的抗体及其制备方法与应用。本发明的荧光染料标记的抗体是将iFluor系列荧光染料标记在CD45抗体表面而得到的。本发明中，用带有琥珀酰亚胺酯基团的iFluor荧光染料标记在CD45抗体表面，通过反应、纯化及浓缩，得到iFluor荧光染料标记的CD45抗体，反应路线缩短，操作简单，产品纯度提高。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	北京;11
申请人：	北京中科纳泰生物科技有限公司
发明人：	李男男;王皓;江涛;郭雨朦
专利状态：	有效
申请日期：	2019-06-06T00:00:00+0800
发布日期：	2019-09-10T00:00:00+0800
申请号：	CN201910491440.4
公开号：	CN110221055A
代理机构：	北京三友知识产权代理有限公司
代理人：	韩蕾;姚亮
分类号：	G01N33/53(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	102488 北京市房山区拱辰街道办事处学园北街11号教育实习楼十层81008
主权项：	1.一种荧光染料标记的抗体，其是将iFluor系列荧光染料标记在CD45抗体表面而得到的。 2.根据权利要求1所述的荧光染料标记的抗体，其中，所述iFluor系列荧光染料带有琥珀酰亚胺酯基团，优选为带有琥珀酰亚胺酯基团的iFluor647染料。 3.根据权利要求1所述的荧光染料标记的抗体，其中，iFluor系列荧光染料与CD45抗体的摩尔比为5:1～20:1。 4.权利要求1～3任一项所述荧光染料标记的抗体的制备方法，该方法包括：将带有琥珀酰亚胺酯基团的iFluor系列荧光染料标记在CD45抗体表面，通过纯化及浓缩，得到iFluor系列荧光染料标记的CD45抗体。 5.根据权利要求4所述的制备方法，其中，将带有琥珀酰亚胺酯基团的iFluor系列荧光染料标记在CD45抗体表面的过程包括：将带有琥珀酰亚胺酯基团的iFluor染料溶液和CD45抗体溶液混合；其中，iFluor染料溶液的溶剂为DMSO，iFluor染料浓度为5～20mM；CD45抗体溶液的溶剂为pH值为8～9的缓冲溶液，CD45抗体的浓度为2mg/mL。 6.根据权利要求5所述的制备方法，其中，CD45抗体溶液的溶剂缓冲溶液为Tris-HCl缓冲液、磷酸氢二钠-磷酸二氢钾缓冲液、磷酸二氢钾-磷酸氢二钾缓冲液、磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液、柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液中的一种或多种；优选为磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液。 7.根据权利要求5所述的制备方法，其中，所述iFluor染料溶液和CD45抗体溶液以为1:1～20:1摩尔比混合，优选摩尔比为5:1～20:1。 8.根据权利要求5所述的制备方法，其中，iFluor染料溶液和CD45抗体溶液通过涡旋的方法进行充分混匀；优选地，于25℃混合0.5～2h；更优选地，于25℃混合0.5～1h；优选地，于5～30Hz震荡仪混合；更优选地，于5～10Hz震荡仪混合。 9.根据权利要求5所述的制备方法，其中，所述纯化及浓缩过程包括： 1)将iFluor染料溶液和CD45抗体溶液混合反应产物iFluor-CD45抗体溶于pH＝6.8～7.5的磷酸盐缓冲液中；优选地，将iFluor-CD45抗体溶解到pH＝7.2的PBS溶液中； 2)将步骤1)中所得的iFluor-CD45抗体溶液转移至4mL超滤管中；优选地，超滤管截流分子量为3K～50K，更优选地，超滤管截流分子量为10K； 3)将步骤2)中超滤管进行超速冷冻离心；优选地，4℃，离心力为2000～10000g，30min；更优选地，4℃，离心力为5000g，30min； 4)重复步骤3)，使iFluor-CD45抗体终体积小于300μL，制得iFluor荧光染料标记的CD45抗体。 10.权利要求1～3任一项所述荧光染料标记的抗体的应用。
所属类别：	发明专利