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原文传递一种CKAP4标记抗体-荧光微球复合物的制备方法及其应用

专利名称：	一种CKAP4标记抗体-荧光微球复合物的制备方法及其应用
摘要：	本发明涉及荧光免疫层析技术领域，具体涉及一种CKAP4标记抗体‑荧光微球复合物的制备方法及其应用。一种CKAP4标记抗体‑荧光微球复合物的制备方法，包括如下步骤：(1)用EDC振荡活化荧光微球；(2)使荧光微球与CKAP4标记抗体偶联；(3)加入5％‑15％BSA溶液振荡封闭，离心，去上清；(4)加入保护液，超声，振荡偶联，离心，去上清；(5)加入5％‑15％BSA溶液，振荡封闭，振荡结束后离心，去上清，沉淀用保护液吹散，即得所述CKAP4标记抗体‑荧光微球复合物溶液。该CKAP4标记抗体‑荧光微球复合物用于制备免疫荧光层析试纸条可实现CKAP4的快速检测，线性范围宽。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	河南;41
申请人：	河南省生物工程技术研究中心有限公司
发明人：	王云龙;张璐;李玉林;程蕾;王继创;邓黎黎
专利状态：	有效
申请日期：	2019-04-01T00:00:00+0800
发布日期：	2019-07-12T00:00:00+0800
申请号：	CN201910256743.8
公开号：	CN110007071A
代理机构：	郑州铭晟知识产权代理事务所(特殊普通合伙)
代理人：	张鹏
分类号：	G01N33/533(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	450001 河南省郑州市高新技术产业开发区科学大道53号4号楼7层84号
主权项：	1.一种CKAP4标记抗体-荧光微球复合物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)将荧光微球置于硼酸缓冲液中，加入EDC振荡活化；(2)离心，去上清，加硼酸缓冲液重悬沉淀，加入标记抗体，旋涡混匀；(3)向步骤(2)所得溶液中加入5％-15％BSA溶液振荡封闭，离心，去上清；(4)向步骤(3)所得沉淀中加入保护液，超声，振荡偶联，离心，去上清；(5)向步骤(4)所得的沉淀中加入5％-15％BSA溶液，振荡封闭，振荡结束后离心，去上清，沉淀用保护液吹散，即得所述CKAP4标记抗体-荧光微球复合物溶液。 2.根据权利要求1所述的CKAP4标记抗体-荧光微球复合物的制备方法，其特征在于，所述保护液包括0.02-0.08M pH＝8.0Tris-Hcl、0.3-0.8％TWEEN-20和0.05-0.15％BSA。 3.一种CKAP4免疫层析检测试纸条的结合垫的制备方法，其特征在于，包括如下步骤： (1)将玻璃纤维膜用处理液处理、干燥；(2)将按照如权利要求1或2所述的方法制备得到的CKAP4标记抗体-荧光微球复合物溶液涂于经步骤(1)处理后得到的玻璃纤维膜上，37℃烘干。 4.根据权利要求3所述的CKAP4免疫层析检测试纸条的结合垫的制备方法，其特征在于，所述处理液包括0.005-0.015M pH＝8.0Tris-Hcl、0.05-0.15％Tween-20、0.05-0.15％BSA和3-8％蔗糖。 5.一种如权利要求3或4所述的方法制备得到的CKAP4免疫层析检测试纸条的结合垫。 6.一种CKAP4免疫层析检测试纸条，包括底板、样品垫、硝酸纤维素膜、吸水垫和如权利要求5所述的结合垫。 7.根据权利要求6所述的CKAP4免疫层析检测试纸条，其特征在于，所述硝酸纤维素膜上包被有检测线T线和质控线C线，所述T线处包被有1.0mg/mL-2.0mg/mL CKAP4包被抗体，所述C线处包被有1.0mg/mL-2.0mg/mL羊抗鼠抗体IgG。 8.根据权利要求6所述的CKAP4免疫层析检测试纸条，其特征在于，所述CKAP4标记抗体来源于CKAP4抗原表位肽多肽A，所述CKAP4包被抗体来源于CKAP4抗原表位肽多肽B，所述多肽A的氨基酸序列为RSHQDFSRQREEL，所述多肽B的氨基酸序列为DSHGPKEDGG。 9.根据权利要求6所述的CKAP4免疫层析检测试纸条，其特征在于，所述CKAP4标记抗体来源于CKAP4抗原表位肽多肽B，所述CKAP4包被抗体来源于CKAP4抗原表位肽多肽A，所述多肽A的氨基酸序列为RSHQDFSRQREEL，所述多肽B的氨基酸序列为DSHGPKEDGG。 10.根据权利要求6-9中任意一项所述的CKAP4免疫层析检测试纸条的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)将所述硝酸纤维素膜粘贴在底板上；(2)分别在所述硝酸纤维素膜的两端粘贴所述结合垫和吸水垫，所述结合垫和吸水垫分别叠压在所述硝酸纤维素膜两端端部的上方；(3)将样品垫叠压在所述结合垫远离所述硝酸纤维素膜的一端的上方。
所属类别：	发明专利