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原文传递血栓调节蛋白化学发光免疫定量检测试剂盒及其制备方法

专利名称：	血栓调节蛋白化学发光免疫定量检测试剂盒及其制备方法
摘要：	本发明涉及一种血栓调节蛋白化学发光免疫定量检测试剂盒及其制备方法，属于免疫诊断技术领域。解决了现有技术中血栓调节蛋白的方法或是精准度底，或是操作复杂、测试结果不稳定的技术问题。本发明的血栓调节蛋白化学发光免疫定量检测试剂盒，包括R1试剂、R2试剂和R3试剂；其中，R1试剂包括链霉亲和素磁颗粒和缓冲液Ⅰ，R2试剂包括化学发光标记物标记的血栓调节蛋白单克隆抗体和缓冲液Ⅰ，R3试剂包括偶联标记的血栓调节蛋白单克隆抗体和缓冲液Ⅰ。该试剂盒采用化学发光免疫分析法对血栓调节蛋白进行检测，具有检测灵敏度高，定量检测准确，操作简单，无放射性风险及检测时间短，并且可以对抗原、抗体类目标物质进行检测的优点。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	吉林;22
申请人：	迪瑞医疗科技股份有限公司
发明人：	高智玲;翟涛;高威;孙成艳;何浩会
专利状态：	有效
申请日期：	2019-06-03T00:00:00+0800
发布日期：	2019-09-03T00:00:00+0800
申请号：	CN201910475000.X
公开号：	CN110196334A
代理机构：	长春众邦菁华知识产权代理有限公司
代理人：	王莹
分类号：	G01N33/68(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	130103 吉林省长春市高新区宜居路3333号
主权项：	1.血栓调节蛋白化学发光免疫定量检测试剂盒，其特征在于，包括R1试剂、R2试剂和R3试剂；所述R1试剂包括链霉亲和素磁颗粒和缓冲液Ⅰ，R1试剂中链霉亲和素磁颗粒的浓度为0.007％～1％；所述R2试剂包括化学发光标记物标记的血栓调节蛋白单克隆抗体和缓冲液Ⅰ，R2试剂中化学发光标记物标记的血栓调节蛋白单克隆抗体的浓度为0.1～2.0μg/mL；所述R3试剂包括偶联标记的血栓调节蛋白单克隆抗体和缓冲液Ⅰ，R3试剂中偶联标记的血栓调节蛋白单克隆抗体的浓度为0.7～4.0μg/ml。 2.根据权利要求1所述的血栓调节蛋白化学发光免疫定量检测试剂盒，其特征在于，所述链霉亲和素磁颗粒的粒径是0.05～1μm。 3.根据权利要求1所述的血栓调节蛋白化学发光免疫定量检测试剂盒，其特征在于，所述化学发光标记物标记的血栓调节蛋白单克隆抗体中，血栓调节蛋白单克隆抗体与化学发光标记物的标记的摩尔比为1:(3～20)；化学发光标记物为鲁米诺、异鲁米诺、三联吡啶钌或吖啶酯。 4.根据权利要求1所述的血栓调节蛋白化学发光免疫定量检测试剂盒，其特征在于，所述偶联标记的血栓调节蛋白单克隆抗体中，血栓调节蛋白单克隆抗体与偶联标记物的标记摩尔比为1:(5～20)；偶联标记物为生物素。 5.根据权利要求1所述的血栓调节蛋白化学发光免疫定量检测试剂盒，其特征在于，所述缓冲液Ⅰ为含有50～200mM的吗啉乙磺酸(MES)、bistris丙烷、柠檬酸或磷酸盐，0.05％～0.1％的稳定剂和0.01～0.1％的防腐剂的pH为6.0～6.5的缓冲液。 6.根据权利要求5所述的血栓调节蛋白化学发光免疫定量检测试剂盒，其特征在于，所述稳定剂为吐温；所述防腐剂为NaN3或ProClin300。 7.根据权利要求1所述的血栓调节蛋白化学发光免疫定量检测试剂盒，其特征在于，该试剂盒中还包括血栓调节蛋白校准品；所述血栓调节蛋白校准品包括浓度分别为0ng/mL、5ng/mL、25ng/mL、50ng/mL、100ng/mL、200ng/mL的血栓调节蛋白溶液。 8.根据权利要求1所述的血栓调节蛋白化学发光免疫定量检测试剂盒，其特征在于，该试剂盒中还包括化学发光预激发液A和化学发光激发液B；所述化学发光激发液A为过氧化氢和硝酸溶液；所述化学发光激发液B为氢氧化钠溶液。 9.根据权利要求1所述的血栓调节蛋白化学发光免疫定量检测试剂盒，其特征在于，该试剂盒中还包括清洗液；所述清洗液为磷酸缓冲液。 10.权利要求1～9任何一项所述的血栓调节蛋白化学发光免疫定量检测试剂盒的制备方法，包括以下步骤：步骤一、制备R1试剂将链霉亲和素磁颗粒溶液加入TBST溶液中，充分混匀后，放置于磁分离器上，直至上清无混浊，弃上清，留取磁颗粒，使用缓冲液Ⅰ清洗磁颗粒后，再用缓冲液Ⅰ配成磁颗粒浓度为0.007％～1％的固相试剂，即为R1试剂；步骤二、制备R2试剂先将血栓调节蛋白单克隆抗体放入离心管中，保证血栓调节蛋白单克隆抗体位于离心管底部位置后加入碳酸缓冲液，充分混匀，混匀后加入化学发光标记物的N,N-二甲基甲酰胺(DMF)溶液，用离心机室温条件下离心；然后将离心管用封口膜密封后放入避光暗盒中，将暗盒放入气浴恒温振荡器中混匀，加入赖氨酸封闭液，放入气浴恒温振荡器中混匀，封闭0.5～1h；再将封闭好的血栓调节蛋白单克隆抗体上葡聚糖凝胶G250柱纯化，用磷酸缓冲液洗脱，分别收集；最后将收集好的血栓调节蛋白单克隆抗体溶液用缓冲液Ⅰ稀释至终浓度为0.1～2.0μg/mL，即为R2试剂；步骤三、制备R3试剂取血栓调节蛋白单克隆抗体，用pH为6.0～6.5的TRIS缓冲液透析纯化后加入已活化的长链磺化生物素，2～8℃反应1～2h，再转入室温继续反应30～40min，最后加入赖氨酸反应30～40min，反应液脱盐柱纯化，加入缓冲液Ⅰ稀释至终浓度为0.7～4.0μg/ml，即为R3试剂。
所属类别：	发明专利