详情

原文传递胃癌HER-2 FISH的组织芯片制作方法

专利名称：	胃癌HER-2 FISH的组织芯片制作方法
摘要：	本发明公开了一种胃癌HER‑2 FISH的组织芯片制作方法，包括选取实验材料、制作实验组织芯片、脱蜡、去除交联预处理、蛋白酶K消化处理、观察细胞消化效果和重复消化、变性和杂交等步骤，通过“先划实验区域再切取组织切面”的选材步骤，最大限度保护蜡块存档的完整性；组织切面面积小，可以节省实验试剂，减少工作量，提高工作效率和准确率；在一个玻片上铺设多个组织切面，可以减少后续处理步骤，进一步提高工作效率，并节省档案的存档空间；观察细胞消化效果的流程处理步骤少、时间短，无需镜油和复染剂，降低成本，并避免被两者干扰的风险，并且不存在组织破损或掉片风险。本发明可以极大的降低实验的材料成本和人工成本，并提高工作效率和准确率。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	福建;35
申请人：	厦门大学附属第一医院
发明人：	黄红浪;李卫华;付莉;张维;钟山
专利状态：	有效
申请日期：	2019-06-06T00:00:00+0800
发布日期：	2019-09-06T00:00:00+0800
申请号：	CN201910490746.8
公开号：	CN110208056A
代理机构：	厦门市新华专利商标代理有限公司
代理人：	渠述华
分类号：	G01N1/28(2006.01);G;G01;G01N;G01N1
申请人地址：	361004 福建省厦门市思明区镇海路上古街10号
主权项：	1.一种胃癌HER-2 FISH的组织芯片制作方法，其特征在于包括以下步骤：步骤1、选取实验材料从IHC的HER-2染色的对照切片中选取典型阳性肿瘤细胞集中的对照区域,对比对照区域在蜡块上划出相应的实验区域，并切取组织切面；所述实验区域的形状为面积小于10mm2的方形；步骤2、制作实验组织芯片将切取的若干个组织切面根据统筹归类，把同类型的若干个不同标本的组织切面铺设在同一玻片上，制成实验组织芯片；步骤3、将实验组织芯片进行脱蜡处理；步骤4、将实验组织芯片进行去除交联预处理；步骤5、将实验组织芯片进行蛋白酶K消化处理；步骤6、观察实验组织芯片的细胞消化效果和重复消化日常室内光线下，在实验组织芯片的各组织切面上分别覆盖去离子水，使用40倍物镜白光镜下分别观察每个组织切面，如果细胞形态结构清晰，细胞核突显，核内透亮，染色质/体呈清晰小黑点分布于细胞核内，胞质透亮，细胞膜变透明，则判断为消化到位；对于消化不到位的组织切面，直接去除其表面的去离子水，平放在水浴箱的湿盒中，用移液枪量取适量蛋白酶K工作液，滴加在消化不到位的组织切面上，反复2-3次，3min/次，再观察细胞消化效果，直至实验组织芯片上的组织切面全部消化到位；步骤7、变性和杂交在暗室中，在组织切面上滴加探针混合物，加盖盖玻片，并用软质胶封边，再进行变性和杂交处理。 2.如权利要求1所述的一种胃癌HER-2 FISH的组织芯片制作方法，其特征在于：所述步骤1中，实验区域的形状为3×3mm2的方形。 3.如权利要求2所述的一种胃癌HER-2 FISH的组织芯片制作方法，其特征在于：所述步骤1中，实验区域的相邻两边互不接触，相邻两边的端部距离为0.5mm。 4.如权利要求1所述的一种胃癌HER-2 FISH的组织芯片制作方法，其特征在于：所述步骤1中，组织切面的厚度为3.5-4μm。 5.如权利要求1所述的一种胃癌HER-2 FISH的组织芯片制作方法，其特征在于：所述步骤2中，将组织切面按照胃癌分型、IHC结果、细胞形态及大小进行统筹归类。 6.如权利要求1所述的一种胃癌HER-2 FISH的组织芯片制作方法，其特征在于：所述步骤2中，将6个不同标本的组织切面铺设在同一玻片上。 7.如权利要求1所述的一种胃癌HER-2 FISH的组织芯片制作方法，其特征在于：所述步骤3中，将实验组织芯片在62℃烤箱中放置18-20小时后，将实验组织芯片浸泡在室温的二甲苯中3次，10min/次；在100%乙醇、85%乙醇、70%乙醇中各浸泡1次，3min/次，再用去离子水洗涤1min。 8.如权利要求1所述的一种胃癌HER-2 FISH的组织芯片制作方法，其特征在于：所述步骤4中，将实验组织芯片在80℃的NaSCN液中浸泡20-30min后，在室温的去离子水中浸泡2次，3min/次；上述NaSCN液的体积为10-15ml。 9.如权利要求1所述的一种胃癌HER-2 FISH的组织芯片制作方法，其特征在于：所述步骤5中，将实验组织芯片放入预热好的蛋白酶K工作液中，在37℃下孵育10-60min后，用去离子水漂洗2次，5min/次。 10.如权利要求1所述的一种胃癌HER-2 FISH的组织芯片制作方法，其特征在于：所述步骤7中，变性的条件为78℃，5min；杂交的条件为37℃，16-20h。
所属类别：	发明专利