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原文传递基于UPLC-QTOF-MS对富硒烟叶的代谢组学研究的方法

专利名称：	基于UPLC-QTOF-MS对富硒烟叶的代谢组学研究的方法
摘要：	本发明公开了一种基于UPLC‑QTOF‑MS对富硒烟叶的代谢组学研究的方法，包括以下步骤：(1)烤烟试验材料的设计；(2)烤烟样品采集及制备；(3)供试样品溶液的制备；(4)仪器条件设置；(5)样品测定；(6)代谢组学数据处理。本发明利用代谢组学研究硒的不同施肥方式及不同的硒浓度对烟草的影响，为硒在烟草生产中的科学施肥方式提供参考依据。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	广西;45
申请人：	广西大学
发明人：	沈方科;顾明华;黄崇峻;唐志友;唐新莲;贾海江;张得平;范晓苏;韦建玉;袁维;路丹;张纪利;石保峰
专利状态：	有效
申请日期：	2019-01-29T00:00:00+0800
发布日期：	2019-09-06T00:00:00+0800
申请号：	CN201910083525.9
公开号：	CN110208392A
代理机构：	南宁胜荣专利代理事务所(特殊普通合伙)
代理人：	邓云书
分类号：	G01N30/02(2006.01);G;G01;G01N;G01N30
申请人地址：	530004 广西壮族自治区南宁市西乡塘区大学东路100号
主权项：	1.一种基于UPLC-QTOF-MS对富硒烟叶的代谢组学研究的方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一：烤烟试验材料的设计烤烟试验采取随机区组试验设计，分别设置对照组、根际施肥组和叶面喷施组，其中叶面喷施组又分为两个实验组，每个组使用的硒营养剂含量不同，试验总共分为4个处理，每个处理小区面积一样，种植前，对供试土壤的理化性质进行检测；步骤二：烤烟样品采集及制备样品采集：烟叶成熟后分小区按照S型路线多点采取组成平均样品，先用自来水再用去离子水清洗样品，迅速干燥后马上进行烘烤，烘烤措施按照标准化生产技术要求执行，烘烤结束后，装入密封袋保存于干燥的环境中；样品制备：将烤烟用植物粉碎机粉碎，装入密封袋留存；步骤三：供试样品溶液的制备精密称取粉碎的烤烟0.09g置于10mL带盖离心管中，加入5mL80％的甲醇-水，加盖漩涡混匀30s，超声提取30min，在4000r/min下室温离心10min，取上层清液，过0.22μm有机滤膜，等待上机；步骤四：仪器条件设置 (1)色谱条件色谱柱：WatersACQUITYBEH C18柱；流动相：A相：0.1％甲酸水；B相：甲醇，设置色谱分离梯度洗脱程序；柱温：35℃；进样体积：2μL； (2)质谱条件四级杆飞行时间质谱，采用电喷雾离子源，各参数设置分别为：扫描模式：正离子扫描；质量扫描范围：低能量：50-1200Da，高能量：100-1200Da；雾化气：氮气；碰撞气：氩气；毛细管电压：3.00KV；锥孔电压：40V；源偏移电压：80V；离子源温度：100℃；脱溶剂气体温度：50℃；锥孔气体流量：50L/h；脱溶剂气体流速：50L/h；碰撞能量:低能量：关，高能：20V；校正液：亮氨酸脑啡肽，正离子：m/z556.2771；步骤五：样品测定将四个组的烤烟样品分别按照处理方法制备待测样品溶液，按照步骤四的色谱条件和质谱条件进行测定，每组6个样本，每个样本进样一次，进样量为2μL；步骤六：代谢组学数据处理使用Waters公司Progenesis QI软件进行色谱峰自动识别提取与峰匹配，将数据结果导入EZinfo.，进行非监督主成分分析(PCA)以及正交偏最小二乘法辨别分析。 2.根据权利要求1所述的基于UPLC-QTOF-MS对富硒烟叶的代谢组学研究的方法，其特征在于，步骤一中所述烤烟的品种为云烟87。 3.根据权利要求1所述的基于UPLC-QTOF-MS对富硒烟叶的代谢组学研究的方法，其特征在于，步骤一中所述对照组处理为未施用硒肥。 4.根据权利要求1所述的基于UPLC-QTOF-MS对富硒烟叶的代谢组学研究的方法，其特征在于，步骤一中所根际施肥组处理为施用生物质碳掺杂壳聚糖纳米硒。 5.根据权利要求4所述的基于UPLC-QTOF-MS对富硒烟叶的代谢组学研究的方法，其特征在于，施用生物质碳掺杂壳聚糖纳米硒量为10kg/亩。 6.根据权利要求1所述的基于UPLC-QTOF-MS对富硒烟叶的代谢组学研究的方法，其特征在于，步骤一中所述叶面喷施组处理为施用氨基酸纳米硒。 7.根据权利要求6所述的基于UPLC-QTOF-MS对富硒烟叶的代谢组学研究的方法，其特征在于，施用氨基酸纳米硒的量为150mL/亩·次及施用氨基酸纳米硒的量为300mL/亩·次。 8.根据权利要求1所述的基于UPLC-QTOF-MS对富硒烟叶的代谢组学研究的方法，其特征在于，步骤一中所述每个处理小区面积为55.56m2。 9.根据权利要求1所述的基于UPLC-QTOF-MS对富硒烟叶的代谢组学研究的方法，其特征在于，步骤二中所述标准为GB/T23219-2008标准。 10.根据权利要求1所述的基于UPLC-QTOF-MS对富硒烟叶的代谢组学研究的方法，其特征在于，步骤三中超声提取的功率为100W。
所属类别：	发明专利