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原文传递一种基于表面增强拉曼散射-激光诱导击穿光谱联用的细菌快速检测方法

专利名称：	一种基于表面增强拉曼散射-激光诱导击穿光谱联用的细菌快速检测方法
摘要：	本发明公开了一种采用SERS检测细菌的样品处理方法，步骤如下：1)取待检样品，收集菌体，采用水分散，得菌液；2)在步骤1)所得菌液中，加入硝酸银，混匀后，再加入硼氢化钠，生成银纳米粒子，得细菌与银纳米粒子共存的溶胶；3)取步骤2)得到的溶胶，滴在疏水性硅片上，自然蒸发，即可。本发明还公开了一种采用SERS‑LIBS联用技术检测细菌的方法。本发明的样品处理方法可以提高拉曼光谱的重现性和稳定性，应用前景优良。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	四川;51
申请人：	四川大学
发明人：	段忆翔;廖文龙;林庆宇
专利状态：	有效
申请日期：	2019-06-14T00:00:00+0800
发布日期：	2019-08-23T00:00:00+0800
申请号：	CN201910514112.1
公开号：	CN110161012A
代理机构：	成都高远知识产权代理事务所(普通合伙)
代理人：	李高峡;张娟
分类号：	G01N21/65(2006.01);G;G01;G01N;G01N21
申请人地址：	610000 四川省成都市一环路南一段24号
主权项：	1.一种采用SERS检测细菌的样品处理方法，其特征在于：步骤如下： 1)取待检样品，收集菌体，用水分散，得菌液； 2)在步骤1)所得菌液中，加入硝酸银，混匀后，再加入硼氢化钠，生成银纳米粒子，得细菌与银纳米粒子共存的溶胶； 3)取步骤2)得到的溶胶，滴在疏水性硅片上，自然蒸发，即可。 2.根据权利要求1所述的样品处理方法，其特征在于：步骤1)中，所述收集菌体是取待检样品，进行细菌培养，离心，取菌体。 3.根据权利要求1所述的样品处理方法，其特征在于：步骤1)中，所述菌液浓度4～6×103–107CFU/mL，优选为5×107CFU/mL。 4.根据权利要求1所述的样品处理方法，其特征在于：步骤2)中，所述硝酸银的浓度为0.05～0.15mol/L，优选为0.1mol/L；所述硼氢化钠的浓度为0.1～0.3mol/L，优选为0.2mol/L。 5.根据权利要求1所述的样品处理方法，其特征在于：步骤2)中，所述硝酸银与菌液的体积比为100～200:1,优选为150:1；所述硼氢化钠与菌液的体积比为100～200:1,优选为150:1。 6.根据权利要求1所述的样品处理方法，其特征在于：步骤3)中，所述疏水性硅片按照如下方法制备：硅片先后在丙酮和水中超声，然后浸泡在浓H2SO4和H2O2的混合溶液中并加热至80～100℃保持20～40分钟，用水洗净后，浸泡在HF溶液中使其表面生成Si-H键，吹干，即可得到疏水性硅片。 7.根据权利要求6所述的样品处理方法，其特征在于：在丙酮和水中超声的时间为10min，超声频率为40KHz；所述浓H2SO4和H2O2的比例为3:1，浓H2SO4的浓度为98％，H2O2的浓度为30％；所述加热至90℃保持30分钟；所述HF溶液的浓度为5％。 8.一种采用SERS定性检测细菌的方法，其特征在于：步骤如下： a、采用权利要求1～7任意一项所述方法处理样品，其中，自然蒸发的时间为0～30分钟； b、激光聚焦，采集拉曼光谱。 9.根据权利要求7所述的方法，其特征在于：步骤b中，拉曼光谱的积分时间为20秒。 10.一种样品中细菌的定量检测方法，其特征在于：步骤如下： (1)取细菌，分散于水中，制成不同浓度的菌液，作为标准品； (2)按照权利要求1、4～7任意一项所述方法处理标准品，液滴完全干燥后，残留圆斑，在圆斑上采集20～50个位点，每个位点累积5发激光得到一个LIBS光谱图，然后对20～50个位点的光谱图进行平均得到LIBS光谱，建立菌液浓度与LIBS光谱的标准曲线； (3)取待检样品，按照权利要求1、4～7任意一项所述方法处理样品，液滴完全干燥后，残留圆斑，在圆斑上采集20～50个位点，每个位点累积5发激光得到一个LIBS光谱图，然后对20～50个位点的光谱图进行平均得到LIBS光谱，根据步骤(2)的标准曲线确定待检样品的菌液浓度。
所属类别：	发明专利