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原文传递一种检测组蛋白乙酰转移酶活性的光电化学生物传感器及其制备方法

专利名称：	一种检测组蛋白乙酰转移酶活性的光电化学生物传感器及其制备方法
摘要：	本发明公开了一种检测组蛋白乙酰转移酶活性的光电化学生物传感器及其制备方法。所述光电化学生物传感器，包括：ITO电极，依次修饰在电极表面的剥离的WS2、聚多巴胺、SMCC、辅酶A、phos‑tag‑biotin、streptavidin。本发明利用WS2良好的生物兼容性和导电性，以及特异性识别的亲和素和生物素，实现光电信号的猝灭，提高组蛋白乙酰转移酶的检测灵敏度。利用SMCC中的马来酰亚胺对CoA中的巯基的特异结合和识别作用，提高组蛋白乙酰转移酶活性检测的特异性。本发明的检测方法简单，实现了仪器小型化，且易于操作，仅对ITO电极表面进行简单的处理，即可实现对组蛋白乙酰转移酶活性的检测。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	山东;37
申请人：	山东农业大学
发明人：	殷焕顺;陈燕;李菲;周云雷;艾仕云
专利状态：	有效
申请日期：	2019-06-11T00:00:00+0800
发布日期：	2019-08-23T00:00:00+0800
申请号：	CN201910501021.4
公开号：	CN110161093A
代理机构：	济南誉丰专利代理事务所(普通合伙企业)
代理人：	薛鹏喜
分类号：	G01N27/26(2006.01);G;G01;G01N;G01N27
申请人地址：	271018 山东省泰安市岱宗大街61号
主权项：	1.一种检测组蛋白乙酰转移酶活性的光电化学生物传感器的制备方法，其特征在于，包括以下步骤： (1)将剥离的硫化钨修饰到预处理后的电极表面； (2)将聚多巴胺修饰于步骤(1)处理后的电极表面； (3)将SMCC修饰于步骤(2)处理后的电极表面； (4)在乙酰辅酶A存在的条件下，组蛋白乙酰转移酶催化底物肽发生乙酰化反应，得到含有辅酶A的催化反应液； (5)将含有辅酶A的催化反应液滴加到步骤(3)处理后的电极表面，利用SMCC的马来酰亚胺与辅酶A的巯基之间的特异性结合作用，将催化反应液中的辅酶A修饰到电极表面； (6)利用辅酶A中的磷酸根与phos-tag-biotin之间的特异结合作用，将phos-tag-biotin修饰到步骤(5)处理后的电极表面； (7)利用phos-tag-biotin与streptavidin之间的特异结合作用，将streptavidin修饰到步骤(6)处理后的电极表面，制备得到检测组蛋白乙酰转移酶活性的光电化学生物传感器。 2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，将剥离的硫化钨修饰到预处理后的电极表面的方法为：将剥离的硫化钨加入到二次水中，超声分散，制成浓度为0.5-5mg/mL的硫化钨分散液；将硫化钨分散液滴加到预处理后的电极表面，红外灯下照射干燥。 3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述剥离的硫化钨由如下方法制备得到：将硫化钨和聚丙烯酸溶解在水中，超声分散，得到分散体；将分散体在2000-10000rpm离心5-30min，收集上清液；将上清液在5000-10000rpm离心5-30min，洗涤，真空干燥。 4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，将聚多巴胺修饰于步骤(1)处理后的电极表面的方法为：将聚多巴胺加入到二次水中，超声分散，制成浓度为0.5-5mg/mL的聚多巴胺分散液；将聚多巴胺分散液滴加到步骤(1)处理后的电极表面，红外灯下照射干燥。 5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(3)中，将SMCC修饰于步骤(2)处理后的电极表面的方法为：将SMCC用DMSO溶解制成0.5-5mg/mL的SMCC溶液；将SMCC溶液滴加到步骤(2)处理后的电极表面，室温和潮湿条件下反应1.5-4小时。 6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(4)中，反应的温度为20-50℃，反应的时间为1-5h。 7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(4)中，所述底物肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。 8.权利要求1-7任一项所述的方法制备的光电化学生物传感器。 9.权利要求8所述的光电化学生物传感器在检测组蛋白乙酰转移酶活性的应用。 10.一种利用权利要求8所述的光电化学生物传感器检测组蛋白乙酰转移酶活性的方法，其特征在于，包括以下步骤：以权利要求8所述的光电化学生物传感器作为工作电极，饱和甘汞电极为参比电极，Pt丝为辅助电极，组成三电极系统进行光电化学信号检测，含有5-20mM Na2HPO4和5-20mMNaH2PO4的PBS缓冲溶液(pH为5.4-8.5)为检测液，建立光电流强度与组蛋白乙酰转移酶浓度之间的关系，对样品中组蛋白乙酰转移酶含量进行检测；优选的，所用检测方法为电流-时间法，应用电位为-0.5–0.5V；优选的，所述PBS缓冲溶液的浓度为0.1-2M。
所属类别：	发明专利