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原文传递蛋白质组样本处理试剂盒、处理方法及应用

专利名称：	蛋白质组样本处理试剂盒、处理方法及应用
摘要：	本发明公开了一种蛋白质组样本处理试剂盒、处理方法及应用。该试剂盒包括：三(2‑羰基乙基)磷盐酸盐、2,2‑二氯乙酰胺、脱氧胆酸钠以及缓冲液。应用本发明的技术方案，蛋白质组样本处理前，将本发明试剂盒中的三(2‑羰基乙基)磷盐酸盐、2,2‑二氯乙酰胺、脱氧胆酸钠以及缓冲液配成处理液，其中，通过脱氧胆酸钠来对细胞/组织样本进行裂解和细胞内全蛋白变性，三(2‑羰基乙基)磷盐酸盐作为还原剂，2,2‑二氯乙酰胺作为烷基化试剂，蛋白质组样本在处理液中数分钟即可完成裂解与还原烷基化。也就是说，在本发明中裂解与还原、烷基化一步完成，这样使得蛋白质组样本处理流程简单，而且节约了时间。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	北京;11
申请人：	北京谷海天目生物医学科技有限公司
发明人：	秦钧;汪宜;丁琛;宋雷;刘明伟;杨星
专利状态：	有效
申请日期：	2019-04-28T00:00:00+0800
发布日期：	2019-09-06T00:00:00+0800
申请号：	CN201910350963.7
公开号：	CN110208448A
代理机构：	北京康信知识产权代理有限责任公司
代理人：	韩建伟
分类号：	G01N30/88(2006.01);G;G01;G01N;G01N30
申请人地址：	102206 北京市海淀区杏石口路80号中央液态冷热源环境系统产业基地项目B区2号楼3层301—183号
主权项：	1.一种蛋白质组样本处理试剂盒，其特征在于，包括：三(2-羰基乙基)磷盐酸盐、2,2-二氯乙酰胺、脱氧胆酸钠以及缓冲液。 2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述三(2-羰基乙基)磷盐酸盐为三(2-羰基乙基)磷盐酸盐溶液，摩尔浓度为50～150mM；所述2,2-二氯乙酰胺为2,2-二氯乙酰胺溶液，摩尔浓度为300～500mM；所述脱氧胆酸钠为脱氧胆酸钠溶液，质量体积浓度为5％～20％W/V；优选的，所述三(2-羰基乙基)磷盐酸盐溶液的摩尔浓度为100mM；所述2,2-二氯乙酰胺溶液的摩尔浓度为400mM；所述脱氧胆酸钠溶液的质量体积浓度为5％～20％W/V；更优选的，所述脱氧胆酸钠溶液的质量体积浓度为10％W/V。 3.根据权利要求1或2所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中的试剂使用时须做稀释使所述三(2-羰基乙基)磷盐酸盐的终浓度为5～15mM；所述2,2-二氯乙酰胺的终浓度为30～50mM；所述脱氧胆酸钠的终浓度为0.5％～2％W/V；优选的，所述试剂盒包含摩尔浓度为100mM的三(2-羰基乙基)磷盐酸盐溶液，摩尔浓度为400mM的2,2-二氯乙酰胺溶液，质量体积浓度为5％～20％W/V的脱氧胆酸钠溶液，使用时，按照三(2-羰基乙基)磷盐酸盐溶液：2,2-二氯乙酰胺溶液：脱氧胆酸钠溶液：缓冲液：质谱水体积比为1：1：1：1：6配制成混合溶液。 4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述缓冲液为Tris-HCl pH＝8.0～8.8。 5.一种蛋白质组样本的处理方法，其特征在于，包括采用如权利要求1至4中任一项所述的蛋白质组样本处理试剂盒进行处理。 6.根据权利5所述的处理方法，其特征在于，包括以下步骤： S1，配置包含三(2-羰基乙基)磷盐酸盐、2,2-二氯乙酰胺、脱氧胆酸钠和缓冲液的处理液； S2，将蛋白质组样本加入所述处理液后加热变性，然后进行超声裂解，得到裂解液； S3，将所述裂解液离心吸取上清，即得到全蛋白裂解液； S4，酶消化所述全蛋白裂解液，得到肽样品；以及 S5，对所述肽样品进行sRP液相分离，得到的肽段用于质谱检测。 7.根据权利要求6所述的处理方法，其特征在于，所述处理液中三(2-羰基乙基)磷盐酸盐的浓度为10mM；2,2-二氯乙酰胺的浓度为40mM；脱氧胆酸钠的浓度为0.5％～2％W/V。 8.根据权利要求6所述的处理方法，其特征在于，所述S2中，所述处理液与蛋白质组样本的体积质量比为3～8：1；优选的，将蛋白质组样本加入所述处理液后进行研磨。 9.根据权利要求6所述的处理方法，其特征在于，所述S2中，加热变性的温度为90～98℃，时间为1～6min；优选的，所述超声裂解的时间为2～5分钟，其中3秒钟超声，3秒钟间歇，振幅25％，超声裂解之后置于冰上静置裂解15分钟。 10.根据权利要求6所述的处理方法，其特征在于，所述处理方法还包括对S3中得到的全蛋白裂解液进行蛋白浓度测定的步骤；优选的，所述S4中采用胰酶消化所述全蛋白裂解液。 11.根据权利要求6所述的处理方法，其特征在于，所述sRP液相分离包括：将所述肽样品使用反相C18分离柱进行分离，洗脱乙腈体积浓度依次为12％、21％和35％，合并12％和35％的洗脱液，得到2组分的肽段，真空抽干后用于质谱检测；优选的，在使用所述C18分离柱之前使用体积浓度为40％～80％的乙腈进行冲洗，然后使用pH＝10的缓冲液平衡所述C18分离柱；优选的，所述质谱检测为全蛋白深度覆盖质谱检测；更优选的，所述质谱检测的条件为离子扫描模式，电喷雾电压2kV，一级质谱分辨率120000，AGC为5e5，最大离子注入时间50ms，全扫描质核比300～1400；二级质谱母离子采用数据依赖模式，HCD碰撞能量设定为35％，AGC为5e3，最大离子注入时间35ms，动态排除18s，质谱采集时间150分钟。 12.如权利要求5至11中任一项所述的蛋白质组样本的处理方法在蛋白质组质谱检测中的应用；优选的，所述蛋白质组样本为胃癌蛋白。
所属类别：	发明专利