详情

原文传递一种基于碳点荧光内滤效应的卡那霉素检测方法

专利名称：	一种基于碳点荧光内滤效应的卡那霉素检测方法
摘要：	本发明公开了一种基于碳点荧光内滤效应的卡那霉素检测方法，制备已知卡那霉素浓度的待测样液A1品；制备空白对照溶液A2品；取A1品和A2品分别用荧光光度计进行扫描测定430nm处溶液的发射峰对应的荧光强度，获得其荧光发射光谱；根据荧光发射光谱绘制得到卡那霉素浓度与荧光强度变化量标准曲线；根据标准曲线建立有关卡那霉素浓度与荧光强度之间相互关系的回归方程；制备未知卡那霉素浓度的待测溶液C品；取C品用荧光光度计进行扫描测定430nm处溶液的发射峰对应的荧光强度，计算C品与A2品的荧光强度差值，将该差值代入线性回归方程中，即可获得C品中卡那霉素的浓度。该方法具有构建方便、灵敏度高、特异性好等优势。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	贵州;52
申请人：	贵州大学
发明人：	吴远根;王金龙;陶菡;王雪郦
专利状态：	有效
申请日期：	2019-06-24T00:00:00+0800
发布日期：	2019-08-27T00:00:00+0800
申请号：	CN201910551029.1
公开号：	CN110174389A
代理机构：	北京联创佳为专利事务所(普通合伙)
代理人：	石诚
分类号：	G01N21/64(2006.01);G;G01;G01N;G01N21
申请人地址：	550025 贵州省贵阳市花溪区花溪大道南段
主权项：	1.一种基于碳点荧光内滤效应的卡那霉素检测方法，其特征在于：包括有以下步骤： A：绘制卡那霉素浓度与荧光强度变化量标准曲线 A1：制备已知卡那霉素浓度的待测样液，得A1品； A2：制备空白对照溶液，得A2品； A3：取A1品和A2品分别用荧光光度计进行扫描测定430nm处溶液的发射峰对应的荧光强度为F和F0，并获得其荧光发射光谱； A4：根据荧光发射光谱制得到卡那霉素浓度与荧光强度变化量标准曲线； B、根据卡那霉素浓度与荧光强度变化量标准曲线建立有关卡那霉素浓度与荧光强度之间相互关系的回归方程； C：制备未知卡那霉素浓度的待测溶液，得C品； D：取C品用荧光光度计进行扫描测定430nm处溶液的发射峰对应的荧光强度，计算C品与A2品的荧光强度差值，将该荧光强度差值代入线性回归方程中，即可获得C品中卡那霉素的浓度。 2.根据权利要求1所述的基于碳点荧光内滤效应的卡那霉素检测方法，其特征在于：所述A，绘制卡那霉素浓度与荧光强度变化量标准曲线的具体方法为： A1：取多支刻度离心管，每支刻度离心管加入一种已知浓度的卡那霉素标准液和卡那霉素适配体溶液，混匀后孵育，然后加入纳米金AuNPs溶液混匀孵育，再加入盐离子溶液继续孵育，最后加入碳点CDs溶液混匀即可制备得到待测样液，为A1品； A2：取1支刻度离心管，用二蒸水替代已知浓度的卡那霉素标准液，按照A1的方法即可制备得到空白对照溶液，为A2品； A3：取A1品和A2品分别用荧光光度计进行扫描测定430nm处溶液的发射峰对应的荧光强度，获得其荧光发射光谱； A4：根据吸收光谱，将不同浓度的A1品与A2品之间的荧光强度差值作为纵坐标，卡那霉素浓度作为横坐标绘制得到卡那霉素浓度与荧光强度变化量标准曲线；所述步骤B中，当卡那霉素浓度C值为40nM≤C≤240nM时，其浓度与荧光强度之间相互关系的回归方程为：y＝0.17C+8.11； y为荧光强度差值＝含卡那霉素的待测品的荧光强度-A2品的荧光强度；所述的制备未知卡那霉素浓度的待测溶液C品的具体方法为： C、用实际样液替代已知浓度的卡那霉素标准液，按照A1的方法即可制备得到未知卡那霉素浓度的待测溶液，为C品。 3.根据权利要求2所述的基于碳点荧光内滤效应的卡那霉素检测方法，其特征在于：所述的盐离子溶液的浓度为30μM；纳米金AuNPs溶液的浓度为3.2nM；碳点CDs溶液的浓度为0.2mg/mL。 4.根据权利要求2所述的基于碳点荧光内滤效应的卡那霉素检测方法，其特征在于：卡那霉素适配体的序列为：5’-TGGGGGTT GAGCTAAGCGA-3’，其浓度为30nM。 5.根据权利要求2所述的基于碳点荧光内滤效应的卡那霉素检测方法，其特征在于：所述碳点CDs溶液的制备方法为：按下述比例备料，0.6g固体柠檬酸：2mL液体甲酰胺：18mL双蒸馏水，将固体柠檬酸和液体甲酰胺溶解在双蒸馏水中，然后将溶液转移到聚四氟乙烯衬里的高压釜中，并在190℃下加热3h，接着再对溶液在MW为500的条件下进行透析处理，之后将溶液进行旋转蒸发，旋转蒸发至总体积的1/5时停止，然后再置于80℃真空干燥箱中干燥8-12h成固体，最后加入双蒸馏水制成浓度为0.2mg/mL的储备溶液，4℃下保存以备使用。 6.根据权利要求1所述的基于碳点荧光内滤效应的卡那霉素检测方法，其特征在于：所述的步骤A3及步骤D中，获得荧光发射光谱的具体方法：取待测品置于石英皿中，用F-4600荧光光度计进行扫描测定430nm处溶液的发射峰对应的荧光强度，获得其荧光发射光谱，波长扫描范围为370-550nm。 7.根据权利要求2所述的基于碳点荧光内滤效应的卡那霉素检测方法，其特征在于：所述的A1品、A2品或C品制备过程中：在刻度离心管中加入已知浓度的卡那霉素标准液、二蒸水或实际样液，和卡那霉素适配体溶液混匀后置于25—35℃条件下孵育5—15min，然后加入纳米金AuNPs溶液，混匀后置于25—35℃条件下再孵育5—15min，之后加入盐离子溶液，混匀后置于25—35℃条件下再孵育25—35min，随后加入碳点CDs溶液，混匀后置于25—35℃条件下再孵育5—15min，最后再加入双蒸馏水混匀。 8.根据权利要求2所述的基于碳点荧光内滤效应的卡那霉素检测方法，其特征在于：所述的A1品、A2品或C品制备过程中：已知浓度的卡那霉素标准液、二蒸水、实际样液、卡那霉素适配体溶液的用量为10.0μL；纳米金AuNPs溶液的用量为100.0μL；盐离子溶液的用量为：30.0μL；碳点CDs溶液用量为20.0μL；最后加入80.0μL双蒸水得到250μL的最终体积。 9.根据权利要求2所述的基于碳点荧光内滤效应的卡那霉素检测方法，其特征在于：所述盐离子溶液为NaCI溶液。 10.根据权利要求2所述的基于碳点荧光内滤效应的卡那霉素检测方法，其特征在于：所述卡那霉素适配体使用前，将适配体溶解于Tris-HCl缓冲溶液中，并在90℃下变性处理5分钟，然后冷却至室温，Tris-HCl缓冲溶液的浓度为10mM，pH值为8.0。
所属类别：	发明专利