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原文传递基于代谢组学的维药昆仑雪菊质量评价方法

专利名称：	基于代谢组学的维药昆仑雪菊质量评价方法
摘要：	本发明公开了一种基于代谢组学的维药昆仑雪菊质量评价方法。该方法包括下述步骤：1)用体积比为85:15的甲醇‑水提取昆仑雪菊，得到样品溶液；2)制备标准品溶液；3)建立了昆仑雪菊的LC‑MS分析方法，并进行了方法学验证。在此基础上，对昆仑雪菊样本进行了代谢组学分析，获得了昆仑雪菊不同部位、不同地区代谢组信息，并采取多元统计分析的方法对各代谢组之间的差异进行了分析。上述研究结果表明，基于LC‑MS的代谢组学分析方法可区分不同产地，不同品种的昆仑雪菊以及昆仑雪菊的不同部位，有望为昆仑雪菊的全面质量控制提供一种新的技术和方法。此外，本研究也为昆仑雪菊的资源开发与合理利用提供了重要参考信息。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	北京;11
申请人：	中央民族大学
发明人：	再帕尔·阿不力孜;乃比·阿不来提;王中华;何秉淑;谢冰
专利状态：	有效
申请日期：	2019-07-16T00:00:00+0800
发布日期：	2019-09-20T00:00:00+0800
申请号：	CN201910639076.1
公开号：	CN110261512A
代理机构：	北京纪凯知识产权代理有限公司
代理人：	赵静
分类号：	G01N30/02(2006.01);G;G01;G01N;G01N30
申请人地址：	100081 北京市海淀区中关村南大街27号
主权项：	1.一种基于代谢组学的昆仑雪菊质量评价方法，包括下述步骤： 1)取昆仑雪菊不同组织器官的干粉末，分别用有机溶剂提取、超声、离心、干燥，得到干燥物，然后将所述干燥物进行复溶、超声、涡旋、离心、过滤，得到昆仑雪菊不同组织器官样品的上清液；所述提取用的有机溶剂为体积比为85:15的甲醇-水的混合溶剂； 2)每种标准品各称取2～3mg，分别用体积比为50:50甲醇-水溶液溶解，配制成1mg/mL的不同的标准品溶液，最后稀释配制成1μg/mL混合标准溶液；所述标准品选自下述任意一种：咖啡酸、芹黄素、山柰酚、绿原酸、金丝桃苷、山柰素；所述混合标准溶液中含有下述六种标准品：咖啡酸、芹黄素、山柰酚、绿原酸、金丝桃苷、山柰素；所述混合标准溶液中每种标准品的浓度均为1μg/mL； 3)采用液相色谱-串联质谱法分别对所述昆仑雪菊不同组织器官样品的上清液和标准品溶液进行测定，得到昆仑雪菊不同组织器官样品和标准品的总离子流色谱图；对得到的色谱数据进行处理，获得含有质荷比、保留时间及峰面积信息的二维数据阵，然后采用多变量统计分析得到差异变量，根据差异代谢物的高分辨质荷比及串联质谱数据，结合标准品谱图的比对分析，即得到昆仑雪菊不同组织器官的植物代谢组的差异。 2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤1)中，所述昆仑雪菊不同组织器官选自下述任意一种：昆仑雪菊整体或花柄或花萼或花瓣。 3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述步骤1)中，所述昆仑雪菊不同组织器官的干粉末与所述有机溶剂的配比为(100±1)mg：1mL；进行所述复溶之前所述超声的时间为30min；进行所述复溶之前所述离心的转速为13400r/min，所述离心的时间为10min；所述复溶的溶剂为体积比50:50的乙腈-水的混合溶剂。 4.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其特征在于：所述步骤1)中，所述昆仑雪菊不同组织器官的干粉末与所述复溶溶剂的配比为(100±1)mg：1mL；进行所述复溶之后所述超声的时间为5min；进行所述复溶之后所述涡旋的转速为1200rpm，涡旋的时间为5min；进行所述复溶之后所述离心的转速可为13400r/min，所述离心的时间为10min。 5.根据权利要求1-4中任一项所述的方法，其特征在于：所述步骤3)中，所述液相色谱条件如下： Ultimate 3000系列超高效液相色谱，Acquity UPLC HSS T3色谱柱，规格：100mm×2.1mm，1.8μm；流动相：A:含0.1％甲酸的水溶液，B:含0.1％甲酸的乙腈溶液；流速：0.3mL/min，进样量：10μL；每次进样前用初始流动相平衡8min，洗脱梯度：洗脱梯度为：0～20min，5％～50％B；20～27min，50％～98％B；27～30min，98％B；30～30.1min，98％～5％B。 6.根据权利要求1-5中任一项所述的方法，其特征在于：所述步骤3)中，所述质谱条件如下： Q-OT-qIT杂合型质谱仪，配有ESI离子源和Xcalibur4.02数据处理系统；蠕动泵直接进样，全扫描模式，扫描范围：m/z 100-1000，分辨率：60000(m/z 200)；喷雾电压：-3KV(负离子模式)；鞘气：35psi；辅助气：15psi；离子传输管和喷雾器温度：380℃(负离子模式)。 7.根据权利要求1-6中任一项所述的方法，其特征在于：所述步骤3)中，所述多变量统计分析的方法包括主成分分析和正交偏最小二乘判别分析对样品进行模式识别，选择对分组贡献较大的变量。 8.根据权利要求1-7中任一项所述的方法，其特征在于：所述步骤3)中，在所述多变量统计分析之后还包括采用载荷图和原始轮廓图带有的Jack-knifed置信区间去筛选去除变异较大、不同地区之间较差大的变量，两两独立样本进行t检验并选择P<0.05的变量的步骤。 9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于：所述步骤3)中，在选择P<0.05的变量的步骤之后还包括运用Pearson相关性分析筛选除同位素离子加合离子和碎片，获得差异变量。 10.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述昆仑雪菊中代表性活性成分的提取结果如下：
所属类别：	发明专利