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原文传递一种串联凝胶色谱法测定金钗石斛多糖分子量分布的方法

专利名称：	一种串联凝胶色谱法测定金钗石斛多糖分子量分布的方法
摘要：	本发明公开了一种串联凝胶色谱法测定金钗石斛多糖分子量分布的方法，以串联的Ultrahydrogel 500柱和Ultrahydrogel 120柱为色谱柱，以含0.01~0.05wt%叠氮化钠的0.01~0.1mol/L的磷酸钠缓冲溶液为流动相。本发明通过色谱柱及流动相的选择，能够便捷、快速的实现不同分子量的金钗石斛多糖的分离，提高了金钗石斛多糖分子量分布的准确度。经验证，本发明方法与采用单一色谱柱或其他类型的色谱柱串联的方法相比，峰形好、结果重现性高、分离度好、准确度高、分子量检测范围宽，具有普遍适用性。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	海南;46
申请人：	海南大学
发明人：	周雪晴;李嘉诚;冯玉红;谢艳丽;赵振东
专利状态：	有效
申请日期：	2019-06-21T00:00:00+0800
发布日期：	2019-09-24T00:00:00+0800
申请号：	CN201910539567.9
公开号：	CN110274972A
代理机构：	济南泉城专利商标事务所
代理人：	贾波
分类号：	G01N30/02(2006.01);G;G01;G01N;G01N30
申请人地址：	570228 海南省海口市人民大道58号
主权项：	1.一种串联凝胶色谱法测定金钗石斛多糖分子量分布的方法，其特征是：采用凝胶色谱法测定金钗石斛多糖的分子量，色谱条件如下：色谱柱：串联的Ultrahydrogel 500柱和Ultrahydrogel 120柱；检测器：示差折光检测器；流动相：含0.01~0.05wt%叠氮化钠的0.01~0.1mol/L的磷酸钠缓冲溶液；流速：0.6~1mL/min；柱温：40~60℃；检测器温度：30~45℃；进样量：5~10μL。 2.根据权利要求1所述的方法，其特征是：Ultrahydrogel 500柱和Ultrahydrogel 120柱串联连接，样品和流动相先流入Ultrahydrogel 500柱，再流入Ultrahydrogel 120柱。 3.根据权利要求1所述的方法，其特征是：流动相的pH为6.5~7.5，优选为7。 4.根据权利要求1、2或3所述的方法，其特征是：流动相为含0.02wt%叠氮化钠的0.05mol/L的磷酸钠缓冲溶液。 5.根据权利要求1所述的方法，其特征是：以不同分子量的葡聚糖为标准品，通过凝胶色谱法绘制分子量的对数值与保留时间的标准曲线，然后通过标准曲线和金钗石斛多糖的保留时间计算金钗石斛多糖的分子量。 6.根据权利要求1、2或3所述的方法，其特征是具体包括以下步骤：（1）配制溶液将金钗石斛多糖用叠氮化钠溶液超声溶解，然后用流动相稀释，充分混合均匀后静置2h，过0.45μm滤膜，得样品溶液；将不同分子量的葡聚糖用流动相溶解，过0.45μm滤膜，得标准品溶液；（2）色谱条件色谱柱：串联的Ultrahydrogel 500柱和Ultrahydrogel 120柱，色谱柱顺序为：先接Ultrahydrogel 500，再接Ultrahydrogel 120；检测器：示差折光检测器；流动相：pH为7的含0.02wt%叠氮化钠的0.05mol/L的磷酸钠缓冲溶液；流速：0.6~1mL/min；柱温：40~60℃；检测器温度：40℃；进样量：10μL；（3）绘制标准曲线将不同分子量的标准品溶液进行色谱分析，记录保留时间，绘制分子量的对数值和保留时间的标准曲线；（4）样品溶液测定：将样品溶液进行色谱分析，得到色谱图，通过标准曲线计算不同保留时间下的金钗石斛多糖的分子量，得到金钗石斛多糖分子量分布。 7.根据权利要求6所述的方法，其特征是：标准品溶液中葡聚糖的浓度为1.5~2.5mg/mL。 8.根据权利要求6所述的方法，其特征是：样品溶液中金钗石斛多糖的浓度为1~3 mg/mL。 9.根据权利要求6所述的方法，其特征是：采用浓度0.01~0.05wt%的叠氮化钠水溶液溶解金钗石斛多糖样品。
所属类别：	发明专利