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原文传递一种铁皮石斛嫩芽中多糖的检测方法

专利名称：	一种铁皮石斛嫩芽中多糖的检测方法
摘要：	本发明公开一种铁皮石斛嫩芽中多糖的检测方法，包括：制作标准曲线；将铁皮石斛嫩芽进行热浸提，冷却、定容，并取上清液备用；取所述上清液与水、DNS混合，加热，冷却，再加水，测A520,根据标准曲线，计算样品还原糖含量；取所述上清液与水、浓硫酸混合，加热后冷却，加1滴酚酞，调节pH至中性，再加水并混合均匀，4℃冷藏2小时，得到混合液；取所述混合液与DNS溶液混合，加热，冷却，再加水，测A520,根据标准曲线，计算样品总糖含量；利用样品总糖含量减去还原糖含量得到多糖含量。本发明提供的检测方法，误差小，速度较快，方便操作。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	江苏;32
申请人：	苏州天成新农生物科技有限公司
发明人：	张杰;王昕怡;吴红升
专利状态：	有效
申请日期：	2019-02-27T00:00:00+0800
发布日期：	2019-05-10T00:00:00+0800
申请号：	CN201910145172.0
公开号：	CN109738427A
代理机构：	南京艾普利德知识产权代理事务所(特殊普通合伙)
代理人：	陆明耀
分类号：	G01N21/78(2006.01);G;G01;G01N;G01N21
申请人地址：	215000 江苏省苏州市工业园区兴浦路333号现代工业坊5号厂房4楼C单元
主权项：	1.一种铁皮石斛嫩芽中多糖的检测方法，其特征在于，包括：制作标准曲线；将铁皮石斛嫩芽进行热浸提，冷却、定容，并取上清液备用；取所述上清液与水、DNS混合，加热，冷却，再加水，测A520,根据标准曲线，利用公式I计算样品还原糖含量；还原糖含量: 取所述上清液与水、浓硫酸混合，加热后冷却，加1滴酚酞，调节pH至中性，再加水并混合均匀，得到混合液；取所述混合液与DNS溶液混合，加热，冷却，再加水，测A520,根据标准曲线，利用公式II计算样品总糖含量；总糖含量: 通过公式III计算得到石斛嫩芽中多糖的含量：C多糖(％)＝C总-C还(III)。 2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述制作标准曲线具体为取标准葡萄糖25-30mg，记录实际称量质量，定容至250mL，分别吸取0mL，0.2mL，0.4mL，0.6mL，0.8mL，1.0mL，并补水至2mL；然后，分别加入5mL DNS，并沸水浴15min，最后放入冰水中冷却15min，补水至25mL，测A520；以标准葡糖浓度为横坐标，以A520为纵坐标绘制标准曲线。 3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述将铁皮石斛进行热提劲具体为：取0.5g铁皮石斛嫩芽干粉m0，于20mL水中，40-50℃时350-450W超声25-30min，再沸水浴热浸提40-60min。 4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述DNS溶液的制备方法为：取3，5-二硝基水杨酸与水混合，加热至(30～50)℃，然后逐步加入5-10g预先溶于水并放凉的氢氧化钠溶液，搅拌至直到溶液清澈透明；将酒石酸钾钠90-100g、苯酚2-3g和无水亚硫酸钠2-3g与所述溶液混合，加热，补水至1L直到完全溶解；室温下存放7d。 5.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，取所述上清液与水、DNS混合，加热，冷却，再加水具体为：取上清液1mL，补水至2mL，加入5mL DNS，并沸水浴15min，最后放入冰水中冷却15min,补水至25ml。 6.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述混合液的制备具体为：上述上清液1mL,补水至2mL，加1mL 8M浓硫酸，沸水浴10min，放冷至室温，加1滴酚酞，用40％氢氧化钠溶液调pH至中性，加水至10mL，摇匀，在4℃冷藏2-4小时。 7.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，取所述混合液与DNS溶液混合，加热，冷却，再加水具体为：取该混合液2.0mL，另加入5mL DNS溶液，沸水浴15min，放入冰水中冷却15min，补水至25mL。 8.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述上清液的提取具体为：超声提取上清，精密量取续滤液2mI，置15mL离心管中，精密加入无水乙醇10mL，摇匀，冷藏1小时，取出，离心20分钟，弃去上清液，沉淀加80％乙醇洗涤2次，每次8mL，离心，弃去上清液，沉淀加热水溶解，转移至25mL量瓶中，放冷，加水至刻度，摇匀得到上清液。 9.根据权利要求8所述的检测方法，其特征在于，所述离心的转速为每分钟4000转。
所属类别：	发明专利