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原文传递一种对过氧化氢特异性响应的基因编码型荧光生物探针及其构建方法和用途

专利名称：	一种对过氧化氢特异性响应的基因编码型荧光生物探针及其构建方法和用途
摘要：	本发明公开了一种对过氧化氢特异性响应的基因编码型荧光生物探针及其构建方法和用途，对过氧化氢具有特异性响应的基因编码型荧光探针是通过将对过氧化氢特异性敏感的PrxA和TrxA分别融合到cpYFP荧光蛋白的两端构成。本发明荧光探针对过氧化氢具有高灵敏性和选择性，在胞内和胞外均能迅速响应过氧化氢，特别是该探针是一种基因编码型探针，能够组成型表达，实现实时动态检测胞内过氧化氢浓度的变化以及用于细胞成像，对于研究氧化还原代谢相关信号通路具有广阔的应用前景。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	上海;31
申请人：	华东理工大学
发明人：	周胜敏;阳瑜红;夏阳;余海军;周瑶;李静怡;吕航亚
专利状态：	有效
申请日期：	2019-04-02T00:00:00+0800
发布日期：	2019-09-17T00:00:00+0800
申请号：	CN201910260413.6
公开号：	CN110243790A
代理机构：	上海翼胜专利商标事务所(普通合伙)
代理人：	翟羽
分类号：	G01N21/64(2006.01);G;G01;G01N;G01N21
申请人地址：	200237 上海市徐汇区梅陇路130号
主权项：	1.一种对过氧化氢特异性响应的基因编码型荧光生物探针的构建方法，其特征在于，所述构建方法为将对过氧化氢特异性敏感的PrxA和TrxA分别融合到cpYFP荧光蛋白的两端。 2.根据权利要求1所述的一种对过氧化氢特异性响应的基因编码型荧光生物探针的构建方法，其特征在于，先将TrxA氨基酸序列的半胱氨酸替换为极性氨基酸，得到TrxA突变体再进行融合。 3.根据权利要2所述的一种对过氧化氢特异性响应的基因编码型荧光生物探针的构建方法，其特征在于，所述极性氨基酸包括谷氨酰胺，天门冬酰胺，丝氨酸，络氨酸，精氨酸，组氨酸，赖氨酸，天门冬氨酸和谷氨酸中的任意一种。 4.根据权利要求3所述的一种对过氧化氢特异性响应的基因编码型荧光生物探针的构建方法，其特征在于，所述构建方法包括如下具体步骤：步骤1：将SEQ ID NO.1所示的TrxA氨基酸序列的第39位半胱氨酸替换为极性氨基酸，得到TrxA突变体；步骤2：将SEQ ID NO.2所示的编码PrxA的核酸序列、步骤1中所得的TrxA突变体的核酸序列和SEQ ID NO.3所示的编码cpYFP的核酸序列进行融合，得到过氧化氢特异性响应的基因编码型荧光生物探针。 5.根据权利要求4所述的一种对过氧化氢特异性响应的基因编码型荧光生物探针的构建方法，其特征在于，TrxA突变体位于cpYFP的氮端或碳端，中间插入连接肽X1，所述X1是GGGS，GGGGS，SAG，GT，LAEAAAKEAA，TSGSPGLQEFGT中的任意一种。 6.根据权利要求4所述的一种对过氧化氢特异性响应的基因编码型荧光生物探针的构建方法，其特征在于，PrxA位于cpYFP的碳端或氮端，中间插入连接肽X2，所述X2是GGGS，GGGGS，SAG，GT，LAEAAAKEAA，TSGSPGLQEFGT中的任意一种。 7.利用权利要求1—6任一所述构建方法制备获得的对过氧化氢特异性响应的基因编码型荧光生物探针。 8.一种多核苷酸分子，其特征在于，所述多核苷酸分子的核酸编码如权利要求7所述的对过氧化氢特异性响应的基因编码型荧光生物探针。 9.一种重组质粒，其特征在于，所述重组质粒表达载体包含编码权利要求8所述的多核苷酸分子基因。 10.权利要求7所述的对过氧化氢特异性响应的基因编码型荧光生物探针在过氧化氢或有机过氧化物的检测中的应用。
所属类别：	发明专利