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原文传递一种基于MnxCo1-xSe2-Pd的夹心型电化学免疫传感器的制备方法及应用

专利名称：	一种基于MnxCo1-xSe2-Pd的夹心型电化学免疫传感器的制备方法及应用
摘要：	本发明涉及一种夹心型电化学免疫传感器的制备与应用，具体说是一种以UiO‑67，金纳米粒子（UiO‑67/Au）的复合材料为传感平台，以MnxCo1‑xSe2‑Pd为二抗标记物的夹心型免疫传感器，本发明属于新型功能材料、生物传感技术领域。UiO‑67/Au具有大的比表面积，良好的生物相容性等优点，可以有效促进电子传递过程，是一种优良的传感材料。MnxCo1‑xSe2‑Pd对H2O2具有良好的催化作用，能够显著提高免疫传感器的灵敏度，扩大检出范围，降低检出限。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	山东;37
申请人：	济南大学
发明人：	曹伟;李璇;魏琴;苗俊聪;许晓婷
专利状态：	有效
申请日期：	2019-07-02T00:00:00+0800
发布日期：	2019-09-17T00:00:00+0800
申请号：	CN201910589727.0
公开号：	CN110243895A
代理机构：	济南誉丰专利代理事务所(普通合伙企业)
代理人：	赵凤
分类号：	G01N27/30(2006.01);G;G01;G01N;G01N27
申请人地址：	250022 山东省济南市市中区南辛庄西路336号济南大学
主权项：	1.一种基于MnxCo1-xSe2-Pd的夹心型电化学免疫传感器的制备方法及应用，其特征在于，包括以下步骤：（1）将玻碳电极用抛光粉打磨，再使用超纯水清洗，将电极置于5 mmol/L 铁氰化钾溶液中，并在 -0.2~0.6 V 电位下进行扫描，使峰电位的差值小于110 mV；（2）将10 μL，1~2 mg/mL UiO-67/Au溶液滴加在电极上，室温下干燥；（3）将10 μL，10~20 μg/mL胰岛素一抗滴加在电极上，室温下干燥之后，用PBS清洗，除去多余抗体；（4）将5 μL，质量分数为1~2% BSA溶液滴加于电极上，用以封闭非特异性结合位点，干燥之后使用PBS洗去多余BSA；（5）将10 μL不同浓度的胰岛素抗原滴加到电极上，室温下干燥并用PBS洗涤；（6）将10 μL，3~4 mg/mL MnxCo1-xSe2-Pd-Ab2溶液滴加于电极上，室温下干燥后用PBS洗涤，夹心型电化学免疫传感器的制备完成。 2.如权利1所述的一种基于MnxCo1-xSe2-Pd的夹心型电化学免疫传感器的制备方法及应用，其所述的UiO-67/Au复合材料的制备步骤如下：（1）UiO-67的制备将45~55 mg 2,2-联吡啶-5,5-二羧酸溶于含有350~400 µL三乙胺的N，N-二甲基甲酰胺（DMF）中,同时,将45~50 mg四氯化锆分散在15~20 mL的DMF中,得到白色溶液,将以上两种溶液混合，然后再加入2~3 ml醋酸,将其倒入高压反应釜中,在85℃下反应24 h，反应结束后,将所得到的沉淀离心收集,用DMF、甲醇和乙醇分别洗涤三次,弃去上清液,将沉淀放入60℃真空干燥箱干燥,最后经过研磨,得到白色粉末UiO-67；（2）UiO-67/Au的制备称取0.1~0.2 g UiO-67在室温下超声分散于10~20 mL甲醇中，得到白色均匀乳浊液，加入0.3~0.4 mL氯金酸混合，在室温下搅拌5 h得到黄色乳浊液，称取0.06~0.07 g硼氢化钠超声溶解于10~20 mL甲醇后，逐滴加入到上述黄色乳浊液中，溶液迅速变为红棕色，继续搅拌2 h，将所得到的混合物离心5 min并用乙醇洗涤三次，将沉淀放入60℃真空干燥箱干燥12 h，最后经过研磨得到UiO-67/Au。 3.如权利1所述的一种基于MnxCo1-xSe2-Pd的夹心型电化学免疫传感器的制备方法及应用，其所述的MnxCo1-xSe2-Pd-Ab2制备步骤如下：（1）MnxCo1-xSe2的制备称取4~6 mmol的Co(NO3)2·6H2O、1~3 mmol的MnCl2·4H2O和6~8 mmol尿素溶解于40~50mL超纯水中，形成透明粉红色溶液，转移至高压反应釜，并在120℃下反应6 h，反应结束后，除去上清液，收集沉淀，并将沉淀用超纯水和乙醇分别离心洗涤三次，放入真空干燥箱中干燥6 h，最后得到紫红色粉末，将1~2 mmol的Se加入到40~50 mL乙二胺中，超声溶解2 h后加入上述紫红色粉末，再将混合液转移到的高压釜中,在180 ℃下反应12 h，反应之后冷却至室温，将所得到的沉淀离心收集用乙醇和超纯水分别洗涤三次，将产品放入60℃真空干燥箱干燥，最后把样品放在400 ℃的氮气中退火1 h；（2）MnxCo1-xSe2-Pd的制备将60~70 mg的MnxCo1-xSe2分散在80~90 mL乙醇水（50%）中，然后加入13~14 mL Na2PdCl4（10 mmol/L）溶液，超声混合，在搅拌下将NaBH4溶液逐滴加入用以还原金属离子，反应2 h后，将所得到的混合物离心收集，用超纯水洗涤三次，将产品放入60℃真空干燥箱干燥；（3）MnxCo1-xSe2-Pd-Ab2的制备用量筒量取2~3 mL的PBS溶液，加入4~6 mg的MnxCo1-xSe2-Pd标记物、1~2 mL的NHS、1~2mL的EDC和100~200 μL的Ab2，将溶液混合后放置在4℃的冷冻震荡器中，振荡24 h，然后用冷冻离心机将所得到的混合物在4℃下用4000 r/min离心分离，用PBS溶液洗涤三次，加入1mL的pH=7.38的PBS溶液配成MnxCo1-xSe2-Pd-Ab2溶液。 4.如权利1所述一种基于MnxCo1-xSe2-Pd的夹心型电化学免疫传感器的制备方法及应用，其特征在于，用于胰岛素的检验，检测步骤如下：（1）使用电化学工作站以三电极体系进行测试，饱和甘汞电极为参比电极，铂丝电极为辅助电极，所制备的电化学免疫传感器为工作电极；（2）使用计时电流法，在10~20 mL、pH为6.0~8.0并含有5 mmol/L H2O2的PBS溶液中进行检测，起始电压为 -0.2~0.6 V，灵敏度为10-4，记录电流变化，绘制工作曲线；（3）将待测样品溶液代替胰岛素的标准溶液进行检测。
所属类别：	发明专利