详情

原文传递一种检测蛋白的试剂盒及其应用

专利名称：	一种检测蛋白的试剂盒及其应用
摘要：	本发明提供一种检测蛋白的试剂盒及其应用，涉及生物化学检测技术领域，本发明所述试剂盒包括：1)羊抗兔IgG与PAMAM的偶联物；2)羊抗鼠IgG与量子点的偶联物；3)待测蛋白的鼠抗A和兔抗B；所述鼠抗A与兔抗B需满足检测同一抗原，且没有交叉反应。本发明所述试剂盒适用范围广且可以灵活组合，能够检测大部分蛋白，包括细胞因子，分泌型蛋白，胞内蛋白以及细胞表面蛋白。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	吉林;22
申请人：	吉林大学
发明人：	施维;刘杨;黄宜兵
专利状态：	有效
申请日期：	2019-06-26T00:00:00+0800
发布日期：	2019-09-17T00:00:00+0800
申请号：	CN201910559911.0
公开号：	CN110244041A
代理机构：	北京高沃律师事务所
代理人：	瞿晓晶
分类号：	G01N33/535(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	130012 吉林省长春市前进大街2699号吉林大学生命科学楼250
主权项：	1.一种检测蛋白的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括： 1)羊抗兔IgG与PAMAM的偶联物； 2)羊抗鼠IgG与量子点的偶联物； 3)待测蛋白的鼠抗A和兔抗B；所述鼠抗A与兔抗B需满足检测同一抗原，且没有交叉反应。 2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述待测蛋白包括细胞因子、胞内蛋白、细胞表面蛋白和分泌型蛋白。 3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述羊抗鼠IgG与量子点的偶联物的制备方法，包括以下步骤： S1、将量子点溶解于活化液中，再依次加入Sulfo-NHS和EDC溶液，活化3～8min，离心弃去上清，将得到的沉淀用活化液溶解，得到活化量子点溶液；所述活化液为含质量浓度0.01％吐温20的pH值为7.4的5mM BS缓冲液； S2、将羊抗鼠IgG与步骤S1得到的活化量子点溶液混合，4℃下避光反应10～16h，再加入质量浓度8～15％的BSA，37℃下反应20～40min，补加洗液，离心去上清，沉淀以洗液溶解，再次离心去上清，将沉淀于保存液中溶解，低速离心，收集上清，得到羊抗鼠IgG与量子点的偶联物；所述洗液为含质量浓度0.01％吐温20的5mM pH 8.0的BS缓冲液；所述保存液为含质量浓度10％的BSA的洗液。 4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述量子点包括浓度为5mg/mL的CdSe/ZnS核壳型羧基水溶性量子点；所述量子点溶解于5倍体积活化液；所述沉淀用3倍体积的活化液溶解；所述量子点与羊抗鼠IgG的质量比为2.25mg：0.1mg；所述Sulfo-NHS和EDC的摩尔比为1:1。 5.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述羊抗兔IgG与PAMAM的偶联物的制备方法，包括以下步骤：将60mg PAMAM溶解于2～5mL DMSO中，搅拌至完全溶解后加入琥珀酸酐，避光反应3～5h，透析，冻干，得到改性后的PAMAM冻干粉；将改性后的PAMAM冻干粉用MES缓冲液溶解，加入NHS和EDC，加入羊抗兔IgG抗体，4℃低温反应12～16h，以3500～5000MWCO的透析袋透析，后再用8000MWCO透析袋透析，冻干得到羊抗兔IgG与PAMAM的偶联物。 6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述PAMAM与琥珀酸酐的电荷比例在1:(10～50)；NHS和EDC的摩尔比为1:1；所述EDC、NHS和羊抗兔IgG抗体的比例为40umol:40umol:1ug。 7.权利要求1～6任一项所述试剂盒在蛋白的流式细胞术检测中的应用。 8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述流式细胞术检测包括以下步骤： (1)加入待测蛋白的鼠抗A和兔抗B进行第一抗体的孵育，得到结合第一抗体的待测蛋白； (2)将步骤(1)得到的结合第一抗体的待测蛋白和量子点与羊抗鼠IgG的偶合物和PAMAM与羊抗兔IgG的偶联物混合，在37℃避光条件下进行第二抗孵育，洗涤； (3)上样于流式分析仪进行分析。 9.权利要求1～6任一项所述试剂盒在蛋白免疫组化检测中的应用。 10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述免疫组化检测包括以下步骤： N1、将待测蛋白与鼠抗A进行第一抗体孵育； N2、加入量子点与羊抗鼠IgG的偶合物，在37℃避光条件下进行第二抗体孵育，洗涤； N3、进行细胞核染色，洗涤，镜检。
所属类别：	发明专利