专利名称: |
一种检测蛋白的试剂盒及其应用 |
摘要: |
本发明提供一种检测蛋白的试剂盒及其应用,涉及生物化学检测技术领域,本发明所述试剂盒包括:1)羊抗兔IgG与PAMAM的偶联物;2)羊抗鼠IgG与量子点的偶联物;3)待测蛋白的鼠抗A和兔抗B;所述鼠抗A与兔抗B需满足检测同一抗原,且没有交叉反应。本发明所述试剂盒适用范围广且可以灵活组合,能够检测大部分蛋白,包括细胞因子,分泌型蛋白,胞内蛋白以及细胞表面蛋白。 |
专利类型: |
发明专利 |
国家地区组织代码: |
吉林;22 |
申请人: |
吉林大学 |
发明人: |
施维;刘杨;黄宜兵 |
专利状态: |
有效 |
申请日期: |
2019-06-26T00:00:00+0800 |
发布日期: |
2019-09-17T00:00:00+0800 |
申请号: |
CN201910559911.0 |
公开号: |
CN110244041A |
代理机构: |
北京高沃律师事务所 |
代理人: |
瞿晓晶 |
分类号: |
G01N33/535(2006.01);G;G01;G01N;G01N33 |
申请人地址: |
130012 吉林省长春市前进大街2699号吉林大学生命科学楼250 |
主权项: |
1.一种检测蛋白的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒包括: 1)羊抗兔IgG与PAMAM的偶联物; 2)羊抗鼠IgG与量子点的偶联物; 3)待测蛋白的鼠抗A和兔抗B; 所述鼠抗A与兔抗B需满足检测同一抗原,且没有交叉反应。 2.根据权利要求1所述的试剂盒,其特征在于,所述待测蛋白包括细胞因子、胞内蛋白、细胞表面蛋白和分泌型蛋白。 3.根据权利要求1所述的试剂盒,其特征在于,所述羊抗鼠IgG与量子点的偶联物的制备方法,包括以下步骤: S1、将量子点溶解于活化液中,再依次加入Sulfo-NHS和EDC溶液,活化3~8min,离心弃去上清,将得到的沉淀用活化液溶解,得到活化量子点溶液; 所述活化液为含质量浓度0.01%吐温20的pH值为7.4的5mM BS缓冲液; S2、将羊抗鼠IgG与步骤S1得到的活化量子点溶液混合,4℃下避光反应10~16h,再加入质量浓度8~15%的BSA,37℃下反应20~40min,补加洗液,离心去上清,沉淀以洗液溶解,再次离心去上清,将沉淀于保存液中溶解,低速离心,收集上清,得到羊抗鼠IgG与量子点的偶联物; 所述洗液为含质量浓度0.01%吐温20的5mM pH 8.0的BS缓冲液; 所述保存液为含质量浓度10%的BSA的洗液。 4.根据权利要求3所述的试剂盒,其特征在于,所述量子点包括浓度为5mg/mL的CdSe/ZnS核壳型羧基水溶性量子点;所述量子点溶解于5倍体积活化液;所述沉淀用3倍体积的活化液溶解;所述量子点与羊抗鼠IgG的质量比为2.25mg:0.1mg;所述Sulfo-NHS和EDC的摩尔比为1:1。 5.根据权利要求1所述的试剂盒,其特征在于,所述羊抗兔IgG与PAMAM的偶联物的制备方法,包括以下步骤: 将60mg PAMAM溶解于2~5mL DMSO中,搅拌至完全溶解后加入琥珀酸酐,避光反应3~5h,透析,冻干,得到改性后的PAMAM冻干粉; 将改性后的PAMAM冻干粉用MES缓冲液溶解,加入NHS和EDC,加入羊抗兔IgG抗体,4℃低温反应12~16h,以3500~5000MWCO的透析袋透析,后再用8000MWCO透析袋透析,冻干得到羊抗兔IgG与PAMAM的偶联物。 6.根据权利要求5所述的试剂盒,其特征在于,所述PAMAM与琥珀酸酐的电荷比例在1:(10~50);NHS和EDC的摩尔比为1:1;所述EDC、NHS和羊抗兔IgG抗体的比例为40umol:40umol:1ug。 7.权利要求1~6任一项所述试剂盒在蛋白的流式细胞术检测中的应用。 8.根据权利要求7所述的应用,其特征在于,所述流式细胞术检测包括以下步骤: (1)加入待测蛋白的鼠抗A和兔抗B进行第一抗体的孵育,得到结合第一抗体的待测蛋白; (2)将步骤(1)得到的结合第一抗体的待测蛋白和量子点与羊抗鼠IgG的偶合物和PAMAM与羊抗兔IgG的偶联物混合,在37℃避光条件下进行第二抗孵育,洗涤; (3)上样于流式分析仪进行分析。 9.权利要求1~6任一项所述试剂盒在蛋白免疫组化检测中的应用。 10.根据权利要求9所述的应用,其特征在于,所述免疫组化检测包括以下步骤: N1、将待测蛋白与鼠抗A进行第一抗体孵育; N2、加入量子点与羊抗鼠IgG的偶合物,在37℃避光条件下进行第二抗体孵育,洗涤; N3、进行细胞核染色,洗涤,镜检。 |
所属类别: |
发明专利 |