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原文传递一种食品脂质提取及检测食品脂质的方法

专利名称：	一种食品脂质提取及检测食品脂质的方法
摘要：	本发明提供了一种食品脂质提取方法和食品中脂质的检测方法，所述食品脂质提取方法通过将食品样品与超纯水、甲醇和二氯甲烷进行多次混合和离心，多次离心后所得下层有机相即为脂质。本发明采用少量样本，通过较为安全的脂质提取试剂，经过一次处理，得到不同脂质的提取物后，同时或分别对其进行定性和定量检测。以减少样本用量，提高安全性，节约样品预处理和检测过程中的耗材，降低成本并提高效率。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	北京;11
申请人：	北京三元食品股份有限公司
发明人：	陈历俊;赵军英;姜铁民;乔为仓;刘茜;刘妍;张明辉;王筱迪;张滢
专利状态：	有效
申请日期：	2019-05-20T00:00:00+0800
发布日期：	2019-09-17T00:00:00+0800
申请号：	CN201910420276.8
公开号：	CN110243956A
代理机构：	北京路浩知识产权代理有限公司
代理人：	王文君;陈征
分类号：	G01N30/02(2006.01);G;G01;G01N;G01N30
申请人地址：	100163 北京市大兴区瀛海瀛昌街8号
主权项：	1.一种食品脂质提取方法，包括将食品样品与混合内标混合，然后与脂质提取溶剂和超纯水进行多次混合以及多次离心，合并多次离心后所得上层相包含神经节苷脂，合并多次离心后所得下层有机相包含磷脂和甘油酯、脂肪酸；其中，所述脂质为神经节苷脂、磷脂、甘油酯和脂肪酸；所述方法所述脂质提取溶剂为二氯甲烷或二氯甲烷、甲醇和超纯水的混合物。 2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述混合内标为氘代甘油酯、不同种类氘代磷脂、不同种类氘代鞘脂中的一种或多种；所述混合内标的量由如下方法确定得到：混合内标加入后的各脂质的质量浓度为原样品中同种类脂质的质量浓度的60-140％。 3.根据权利要求1或2所述的方法，包括以下步骤：将二氯甲烷与甲醇的混合物作为脂质提取溶剂，并加入超纯水，以进行第一次离心，得上层相和下层有机相；其中，所述二氯甲烷、甲醇和超纯水的体积比为1-3.5:1-3:0.2-0.55，优选为1-3:1-3:0.3-0.55；所述二氯甲烷的用量为0.5-2mL/100μL液态食品样品或1-3mL/0.05g粉末固体食品样品；所述二氯甲烷的用量优选为0.6-1.2mL/100μL液态食品样品或1.5-2.5mL/0.05g粉末固体食品样品。 4.根据权利要求3所述的方法，包括以下步骤：取第一次离心所得上层相，向其中加入二氯甲烷，以进行第二次离心，得到上层相以及下层有机相；所述二氯甲烷的用量为0.2-1.8mL/100μL液态食品样品或1-3mL/0.05g粉末固体食品样品；优选地，所述二氯甲烷的用量为0.6-1.2mL/100μL液态食品样品或1.5-2.5mL/0.05g粉末固体食品样品；取第一次离心所得下层有机相，向其中加入超纯水、甲醇和二氯甲烷，以进行第三次离心，得到上层相以及下层有机相；所述超纯水、甲醇和二氯甲烷的体积比为0.3-1:1-3.5:0.5-3；优选为0.3-0.6:1-2:0.5-1；所述二氯甲烷的用量为0.3-1mL/100μL液态食品样品或0.3-1mL/0.05g粉末固体食品样品。 5.根据权利要求4所述的方法，包括以下步骤：将第二次离心得到的上层相与第三次离心得到的上层相合并，氮气吹干，即得神经节苷脂；优选地，所述方法进一步包括纯化所述神经节苷脂的步骤：将所得神经节苷脂溶解于60-90％的甲醇溶液中，然后离心，取上层相，氮气吹干，即得所述神经节苷脂；优选地，所述甲醇溶液的用量为100-350μL/100μL液态食品样品或100-350μL/0.05g粉末固体食品样品。 6.根据权利要求4所述的方法，包括以下步骤：将第二次离心得到的下层有机相与第三次离心得到的下层有机相合并，氮气吹干，即得磷脂和甘油酯、脂肪酸；优选地，所述方法进一步包括纯化所述磷脂和甘油酯、脂肪酸的步骤：将所得磷脂和甘油酯、脂肪酸溶解于乙酸铵的二氯甲烷和甲醇溶液中，然后离心，取下层有机相，氮气吹干，即得所述磷脂和甘油酯、脂肪酸；优选地，所述乙酸铵的二氯甲烷和甲醇溶液中的二氯甲烷和甲醇的比例为0.6-1.5:0.6-1.2；优选为1:1；所述乙酸铵的浓度为5-15mmol/L，优选为8-12mmol/L；所述乙酸铵的二氯甲烷和甲醇溶液的用量为0.2-2.5mL/100μL液态食品样品或0.5-2.5mL/0.05g粉末固体食品样品。 7.根据权利要求6所述的方法，包括如下步骤：将所得磷脂、脂肪酸和甘油酯溶解于体积比为0.6-1.5:0.6-1.2的二氯甲烷和甲醇溶液中，得复溶脂质溶液，然后将所述复溶脂质溶液采用硅胶柱进行分离，分别得到所述甘油酯/脂肪酸和所述磷脂；优选地，所述二氯甲烷和甲醇溶液的用量为0.2-2.5mL/100μL液态食品样品或0.5-2.5mL/0.05g粉末固体食品样品。 8.一种检测食品脂质的方法，包括如下步骤： 1)磷脂/甘油酯/脂肪酸检测：取权利要求1-7中任一项方法提取得到的所述甘油酯、脂肪酸和磷脂，将其稀释至脂质可定量检测的上限和下限之间，采用LC-Q-TOF-MS(AB Sciex6600)在如下条件中进行检测：色谱柱为：Kinetex C18柱(150mm×4.6mm,2.6μm；Phenomenex,Torrance,CA,USA)或者Kinetex C18柱(50mm×3mm,2.6μm；Phenomenex,Torrance,CA,USA)；柱温为30-50℃；流动相A为5nmol/L的乙酸铵溶液(甲醇\乙腈\水，1\1\1，V\V\V)，流动相B为5nmol/L的乙酸铵溶液(异丙醇)，流速0.3-0.8mL/min，进样量1-3μL，进行梯度洗脱。 9.根据权利要求8所述的检测食品脂质的方法，还包括如下步骤： 2)神经节苷脂的检测：取权利要求1-7中任一项方法提取得到的所述神经节苷脂，将其稀释至脂质可定量检测的上限和下限之间，采用LC-Q-TOF-MS(AB Sciex6600)在如下条件中进行检测：色谱柱：BEH C18(100×2.1mm，1.7um；Waters)，柱温为30-50℃；流动相A为90ml水+10ml甲醇+0.1ml1mol/L的乙酸铵，流动相B为100ml甲醇+0.1ml1mol/L的乙酸铵，流速0.3mL/min，进样量为10μL，进行梯度洗脱。
所属类别：	发明专利